INTRODUCCION
La agricultura ha intentado mejorar la calidad y cantidad de cosechas mediante métodos de selección y cruzamiento entre ejemplares que poseían las características deseadas, por lo que las variaciones genéticas obtenidas eran producto de mutaciones al azar. Con la aplicación de las técnicas de la ingeniería genética se han podido desarrollar organismo modificado genéticamente que son aquel cuyo material genético es manipulado con el fin de otorgarle alguna característica específica1. La Biotecnología aplicada permite transferir información entre una planta y una bacteria, como es el caso de las plantas Bt que expresan un gen que codifica la proteína tóxica de Bacillus thuringiensis que son resistentes a las larvas de los lepidópteros2.
Son muchas las variedades de plantas transgénicas que se consumen como alimento y que han permitido una reducción importante de las cantidades de pesticidas químicos que se utilizan para eliminar plagas. Aunque a la fecha no existen pruebas contundentes de daño a la salud humana por el uso y consumo de los organismos vivos o sus productos que hayan sido objeto de una modificación genética empleando estas nuevas herramientas. Esta tecnología como cualquier otra, puede tener riesgos. Por ello, la Organización de las Naciones Unidas (ONU),concertó e instrumentó a través de sus organismos, diferentes acuerdos, documentos y marcos jurídicos para el manejo responsable de los OGM3.

La percepción que el público chileno tiene de la biotecnología, y de los OGMs en particular, ha sido escasamente estudiada. EL consumidor esta interesado en la biotecnología y tiene curiosidad por saber mas acerca de sus beneficios y riesgos, pero siente que su grado de conocimiento o información es exiguo. Puesto el acento en los alimentos derivados de cultivos genéticamente modificados, un alto porcentaje sostiene la idea que debiera prohibirse la aplicación de la biotecnología en la producción de alimentos, pero presenta una mayor aceptación de las aplicaciones médicas. Chile ocupa uno de los mas altos lugares en la escala de percepción negativa de alimentos transgénicos (73% de los habitantes del Gran Santiago esta en contra .
Para la comercialización de una especie vegetal en los países que han legislado sobre el uso de transgénicos, se requiere ahora definir si en la especie en cuestión existen variedades transgénicas. Las técnicas de detección de transgénicos se basan en la determinación de los genes introducidos en la planta modificada. Esta detección se realiza utilizando un procedimiento conocido comúnmente como PCR. Por medio de este método se amplifica el DNA que se quiere detectar, obteniendo así una cantidad facil deobservar por los métodos corrientemente usados para medir DNA. Existen algunos protocolos de PCR que permiten no solo detectar el OGM si no identificarlo dentro de las diferentes variedades existentes5.


EL objetivo del siguiente informe es detectar si algunos alimentos de nivel comercial provienen de organismo genéticamente modificado mediante la extracción de DNA genómico del producto (ZUCOSO) y posteriormente realizar la técnica de PCR para detectar si el alimento es un GMO.


MATERIALES Y METODOS

Extracción de DNA genómico: Se pesaron 1.0 g de muestra de Zucosos en balanza granataria, Luego se agregó 7 mL de agua destilada para moler y homogenizar la muestra en un mortero. Se tomaron 500 µL de muestra homogenizada y se transfirió a un tubo de microcentrifuga de 1.5 mL, y se agregó 300 µL de buffer CTAB 2X y Calentar la muestra a 65°C durante diez minutos. Luego de esto se centrifugó la muestra por cinco minutos a 12.000 rpm y el sobrenadante rescatado se agregó 300 µL de cloroformo y nuevamente se centrifugo 5 minutos a 12.000 rpm para recuperar la fase acuosa, y transferirlo a un tubo de eppendorf de 1.5 mL. Después se agregó 300 µL de isopropanol para luego centrifugar a 12.000 rpm durante 20 minutos. Luego se lavo el pellet con 300 µL de etanol 70% y se realizó vortex. Después del lavado se centrifugó a 12.000 rpm durante 5 minutos y se eliminó el sobrenadante paradejar secar el pellet durante 1 hora. Se resuspendió el pellet en 20 µL de agua estéril libre de nucleasas.
PCR: Se realizo PCR mediante el kit BioRad que incluye, mix A, que contiene 2 primers para PSII (gen del cloroplasto fotosistema II) y Mix B que contiene 2 primers para GMO (Promotor 35S del virus del mosaico de la coliflor y el terminador del gen de la nopalina sintasa de Agrobacterium tumefaciens). Cada mix contiene buffer 10X, dNTP´s, Taq polimerasa, MgCl2 y Buffer de carga. Se agregaron 2 µL de DNAg en dos tubos eppendorf y se agregó a un tubo 8 µL Mix A y al otro tubo 8 µL de Mix B.


Electroforesis: Se preparo 100 mL de gel de agarosa al 2% tomando 1 gramo de agarosa concentrada en 100 mL de buffer TAE 1X homogenizando en intervalos de 30 segundos durante 2 minutos y 30 segundos aproximadamente en calor (microondas). Se agregó 2 µL de gel red y entonces se esperaron 10 minutos aproximadamente para la gelificacion. Luego se traspasó a camara electroforética el gel, y se dejó sumergido en buffer TAE 1X. Se cargó ladder de 100 pb de new england en el bolsillo 1 y luego mas muestra a analizar con sus respectivos mix. Despues de puestas las muestras en los carriles se encendió la camara y se llevo a cabo la electroforesis a 100 volt, durante 30– 40 min.

RESULTADOS
Para el analisis de alimentos comerciales, se utilizo técnica de PCR para identificar bandas del gen incorporado que contiene secuencias comunes las cuales son el promotor 35S y el terminador nos y para identificar el gen endógeno común de las plantas que es el fotosistema II del cloroplasto. Los resultados del PCR no se observan bandas en los alimentos y se visualiza la aparición de dímeros encontrados en los productos. Solo se observo bandas en el control positivo. (Figura 1)


Figura 1: Electroforesis en gel de Agarosa 1%. Analisis de alimentos mediante PCR para la identificación de alimentos transgénicos. Carril 1(mix A) y 2 (mix b) corresponde a DNA Extraido de zucosos. Carril 3(mix A) y 4 (mix b) corresponde a DNA Extraido de Doritos. Carril 5(mix A) y 6 (mix b) corresponde a DNA Extraido de Maruchan. Carril 7(mix A) y 8 (mix b) corresponde a DNA Extraido de cabada. Controles negativos con mix A (carril 9) y mix B (Carril 10) sin DNA y controles positivos con mix A (carril 11) y mix B (Carril 12). Mix A corresponde a primers para PSII y Mix B a primers para el promotor 35S y terminador Nos. Ladder de 100 pb de new england.












DISCUSION.
En este practico analizamos una muestra de zucosos el cual contiene una base alimentaria principalmente de granos de cereal, semolina de maíz y harina integral de maíz, extracto de malta (cebada) yuna gran fuente de calcio6. Existe evidencia que para un GMO en maíz, suelen verse interrumpidos por una delta endotoxina Bt11 proveniente de Bacillus thuringesis la cual es una bacteria gran positivo que su delta endotoxina provoca la muerte de ciertos insectos perforadores7.
De acuerdo a los resultados obtenidos en el practico, la electroforesis realizada no logra sugerir si nuestro alimento analizado que corresponde a zucosos es o no GMO, debido a que no existe la presencia de bandas para la reacción de PCR2 que contiene los oligonucleótidos necesarios para hibridar con un promotor 35S lo que nos permitiría determinar si la muestra problema es o no GMO, cosa que tampoco fue obtenida por ningún grupo del laboratorio.
Para la reacción de PCR 1 que contiene los partidores que hibridan con el gen del fotosistema II (PSTII) del cloroplasto que nos verifica si se hizo una correcta extracción de DNA genómico desde nuestra muestra problema esto es comúnmente utilizado como control positivo, tampoco se obtuvo banda con lo que no podemos verificar que se realizo una correcta extracción de DNA.
Adicionalmente se utilizo otro control positivo una muestra que se sabe amplificaría con los dos mix de oligonucleótidos, la cual fue extraído con los mismos materiales utilizados para las demas extracciones y cargada los carriles 11 y 12, de lo cual si se obtuvo banda.
Por lo tanto solo podemosasociar los resultados obtenidos con una mala manipulación en la extracción de DNA debido a que en estos carriles si se obtuvo banda, por lo que se determina que si existían lo oligonucleótidos en el set y la reacción de PCR se realizo fidedignamente

CONCLUSION.
En base a nuestros objetivos planteados, concluimos que no logramos detectar si los alimentos de nivel comercial provienen de organismos genéticamente modificados mediante la utilización de ciertas técnicas moleculares (Extracción de DNA, PCR y electroforesis).






BIBLIOGRAFIA.
(1) Bio Businness Group (2004) Introduccion a los organismos genetcamentes modificados (OGMs
(2) Wysocki S.Mussin C.(2006) Organismos Geneticamente Modificados: Usos Alimentarios.
(3) Bolizar F. (2011) Por un uso responsable de los organismos genéticamente modificados.
(4) Goberno de Chile. Comision nacional del medio ambiente (2005) Bases para el marco nacional de bioseguridad de chile
(5) Espejo R. INTA, Universidad de chile. Organismos Geneticamente Modificados
(6) Información nutricional zucosos Nestle. Pagina web: https://www.cerealesnestle.cl/products/cereals/zucosos?gclid=CL7FgLOnnsECFYMF7Aodu3oALg
Fecha: 08-10-2014
Hora: 21:52
(7) Sanchez-Yañez, J. M., & Peña-Cabriales, J. J. (2000). Persistencia de esporas de Bacillus thuringiensis en hojas de maíz, de frijol y en el suelo. TERRA, 18(4), 326.