PRACTICA XVlll
DETERMINACION CELULAR EN TUBO
METODICA
Fundamento
Los hematíes problema contienen las sustancias antigénicas del sistema ABO y se enfrentan a sueros conocidos que poseen anticuerpos frente a esos antígenos.
El resultado final es la presencia o no de aglutinación en los hematíes reaccionantes.
Material necesario
° Tubos de centrifuga
° Rotulador de vidrio
° Pipetas pasteur
° Centrifuga
° Gradillas

Reactivos
° Suero anti-A
° Suero anti-B
° Solución salina fisiológica
Muestra
° Sangre total anticoagulada. Para esta técnica es preferible usar una suspensión de los hematíes problema.

Técnica
1. En primer lugar realizamos el lavado de los hematíes problema. Para ellos rotularlos convenientemente unn tubo de centrifuga y añadimos 1 ml de la muestra de sangre. Completamos el tubo con solución salina y agitamos para suspender los hematíes. Centrifugamos 4 minutos a 2000 r.p.m y decantamos el sobrenadante.

2. A los hematíes del tubo les añadimos una cantidad suficiente de solución salina como para obtener una suspensión al 2%. Esto es aproximado aunque debemos establecer los limites entre 2 y el 4%













3. Rotular tres tubos de ensayo bien limpios con letras A, B y D
4.Añadir a cada tubo una gota de la suspensión de hematíes al 2%
5. Añadir dos gotas de suero anti-A en el tubo A, dos gotas de anti-B en el tubo-B.
6. Centrifugamos todos los tubos durante 1 minuto a 1.000 r.p.m o 30 segundos a 3.400 r.p.m (centrifuga de inmunohematologia)

Lectura de resultados
Después de centrifugar, golpeamos suavemente el fondo de cada tubo para desprender el sedimento y observar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación.
Reacción negativa: Los hematíes se resuspenderan homogéneamente
Reacción positiva: Se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento.

INTERPRETACION CLINICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS
Se realiza igual que en la técnica en porta.
Es importante destacar que los restos de detergente o sustancias extrañas en los tubos puede ocasionar falsos negativos.
También pueden darse falsos positivos, principalmente por dos motivos:
° Aglutinación no especifica: Se debe a la presencia de acido hialuronico en la sangre, procedente de la gelatina de Wharton de cordon umbilical, y se elimina eñadiendo una gota de hialuronidasa a la suspensión de hematíes.
° Fenómeno de Rouleaux: Consiste en una agrupación no especifica de hematíes, que adoptan unaimagen de pilas de monedas. Las sustancias que mas frecuentemente originan este fenómeno son: el fibrinógeno, las gammaglobulinas, el dextrano y la polivinilpirrolidona.
Estos fenómenos pueden evitarse con el lavado previo de los hematíes problema.
1. sQué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis?

2. sA que concentración se prepara la suspensión de hematíes problema?


3. s Como se ve una aglutinación positiva?

4. sA que se debe el fenómeno de Rouleaux?


5. sCómo se pueden evitar los falsos positivos?

RESULTADOS OBTENIDOS
AGLUTINACION NO AGLUTINACION
Tubo A
Tubo B
Tubo AB

Valoración de los resultados obtenidos. La sangre ensayada es del grupo eritrocitario
 A
 B
 AB
 O
OBJETIVO
Determinar el grupo sanguíneo de una persona a partir de la centrifugación de la sangre en tubos de ensaye.

PROCEDIMIENTO
1. Primera mente debemos de preparar los materiales necesarios para la extracción de sangre para posteriormente realizar la extracción correctamente, cuando ya extrajimos la muestra de sangre la vaciamos en un tubo con anticoagulante EDTA.

2. Centrifugamos el tubo con con la muestra, del que centrifugamos, pusimos 1ml de muestra( sangre) en un tubo con EDTA y los rellenamos consolución salina después decantamos el sobrenadante.



3. De lo que se centrifugo se puso una gota a tres tubos, los cuales previamente fueron marcados con las letras A, B y D y agregamos una gota de los antisueros con sus correspondientes letras.


4. Después agitamos los tubos y volvimos a centrifugar los tres tubos ya con la gota de sangre y los antisueros durante 1 minuto a 1.000 r.p.m o 30 segundos a 3.400 r.p.m.


5. Leer los resultados




OBSERVACIONES
Las observaciones que yo puede hacer de esta practica de detección celular es que para llevarla acabo necesitas tiempo ya que es un poco tardado el estar centrifugando para decantar el sobrenadante, además de que tardamos en la extracción de la sangre y al momento de realizar el procedimiento nos tardamos un poco mas de lo previsto.

RESULTADOS
El resultado de la practica realizada fue conocer si hay presencia o no de aglutinación de los hematíes reaccionantes.

Y nuestro resultado fue el resultado fue A- Rh +

CONCLUSION
Que es muy importante que para que la práctica sea realizada correctamente debemos de seguir el procedimiento al pie de la letra y por ultimo saber leer correctamente los resultados de la aglutinación o no aglutinación.