REACTIVOS DE UN LABORATORIO CLÍNICO

Introducción.

Los reactivos son aquellas sustancias que interactúan con otra para formar un compuesto y ver como este afecta a lo que se va a estudiar, estos tienen una clasificación dependiendo del uso y de que tipo de reactivo sea, se puede diluir en la muestra o prepararla concentrada.

La clasificación de los reactivos seria por categoría química, sustancias puras disolventes, por categoría enzimática dependiendo de estos catalizadores y categoría inmunológica. Estos se pueden encontrar en forma solida, liquida y diluida. Se necesitan una serie de técnicas para preparar la muestra con los reactivos usando las mas sencillas, rápidas que indican presencia o no de la sustancia midiendo en porcentaje la concentración y en forma de conteo; o realizarlo con técnicas mas sofisticadas, costosas, complejas y largas.

Los reactivos se presentan en varias formas y modelos y tamaños, están los kits comerciales que vienen en conjunto para realizar diagnósticos especificados y tienen una serie de ventajas como son estabilidad, fácil manejo y desventajas generalmente costosas y cuando se acaba un reactivo se tiene que comprar todo el kit.

Estos reactivos contienen etiquetas e ilustraciones que son colocados en ellos para tener un buen manejo, precaución y saber lo que contienen en proporción y cantidad. Existen también reactivos especiales para colorar una muestra como son Wright, Giemsa, Azul de metileno entreotros estos permiten observar células, tejidos, microorganismos, bacterias que son difíciles de observar por su transparencia.

Los anticoagulantes se usan para obtener plasma o suero de la sangre y estudiarla también, realizar pruebas de coagulación entre estos están heparina, EDTA, citrato trisódico, anticoagulante de wintrobe. Todos estos compuestos o reactivos son de gran ayuda para reconocer y estudiar mejor todo lo contenido en la sangre u otro elemento.

Categoría general de los reactivos.

Los reactivos son toda aquellas sustancia que interactúa con otra en una reacción química que da lugar a otras sustancias de propiedades, características y conformación distinta, denominadas productos de reacción o simplemente productos.

Sustancia reactiva.

El término Reactivo es un concepto global que puede dividirse en varios conceptos. Estos incluyen el compuesto o sustancias reactiva, una “sustancia que se emplea para producir una reacción química que sirve para medir cantidades pertenecientes a otras sustancias”. Sin embargo, es raro encontrar un sólido puro o una sustancia reactiva liquida que se añada directamente a la muestra. Por lo general, las sustancias reactivas son, ya sea, una solución reactiva o una composición reactiva. Ejemplo: El Mercurio

Solución reactiva

Frecuentemente denominada reactivo, es una solución de sustancias químicas o compuestos biológicos específicos, o de los dos, en un solvente también especifico.
Se añade a la muestra para:
až¢ Diluirla
až¢ Para facilitar su introducción en un instrumento analítico
až¢ Para extraer o purificar el componente a medir o varios componentes químicos ylograr que genere una señal medible.
Las soluciones reactivas se preparan a granel generalmente y se almacenan en condiciones previamente específicas. Para realizar mediciones se toma un a porción de la preparación madre. Ejemplo:
LUGOL: El lugol o solución de Lugol es una disolución de yodo molecular I2 y yoduro potásico KI en agua destilada. Este producto se emplea frecuentemente como desinfectante y antiséptico, para la desinfección de agua en emergencias y como un reactivo para la prueba del yodo en análisis médicos y de laboratorio.

Composición reactiva

Son sustancias reactivas en cantidades pre medidas, cada una lista para procesar una muestra y, en ocasiones, preparadas en forma conveniente, por ejemplo, unidas a una fase sólida, a una cinta o colocadas en una laminilla. Por lo general se utiliza una sola vez y se descarta. Estas composiciones reactivas normalmente están ligadas a un instrumento especifico de tal manera que la “Composición reactiva/ instrumentos” forman un sistema analítico integrado. En ocasiones, una composición reactiva se utiliza en un método de análisis correcto de instrumento, en el que el resultado se obtiene por simple inspección visual una vez que ocurrió la reacción.
 
Clasificación general de los reactivos según el reactivo critico:
√ Categoría Química

Sustancias puras: son aquellas que tienen propiedades constantes clasificadas en elementos como metales y no metales que forman compuestos como óxidos, ácidos, sales, bases y compuestos orgánicos.
Propiedades de las sustancias puras: Las sustancias puras están formadas por partículas  (átomos o moléculas) iguales, tienen una composiciónfija, no pueden separase por medios físicos. Tienen  propiedades específicas: densidad, la temperatura permanece constante en los cambios de estado  temperatura de ebullición y fusión), solubilidad, conductividad térmica y eléctrica  y numerosas  propiedades más.
Disolventes Puros
Sustancia que es capaz de destruir la agregación de las moléculas de un cuerpo soluble. Una acepción más amplia de la palabra es aquel componente que se halla en mayor proporción en una mezcla homogénea.

√ Categoría Enzimática

-Enzimas ± purificadas y caracterizada

Las enzimas son catalizadores de origen biológico que parecen cumplir muchos de los requisitos necesarios para impulsar esta nueva industria química. Son catalizadores muy activos en medios acuosos y en condiciones muy suaves de temperatura, presión, pH,etc.

Son catalizadores muy específicos: pueden modificar un único substrato en una mezcla de substratos muy similares e incluso pueden discernir entre dos isómeros. Son catalizadores muy selectivos: pueden modificar un único enlace o un único grupo

A pesar de esas excelentes propiedades catalíticas, las enzimas han ido evolucionando a través de los siglos para cumplir mejor las necesidades fisiológicas de los seres vivos y no para ser utilizadas en sistemas químicos industriales. Así, las enzimas son catalizadores solubles, generalmente muy inestables y que sufren inhibiciones por substratos y productos. Además, las enzimas muchas veces no poseen todas las propiedades ideales (actividad, selectividad, etc) cuando queremos que canalicen procesos distintos de los naturales (por síntesis en lugar de hidrólisis), sobre substratos nonaturales, en condiciones experimentales no convencionales (en disolventes orgánicos no-tóxicos).

aœ“ Categoria Inmunologica
- Ags y acs ± purificados y caracterizados + Categoría Enzimática
Análisis cuantitativo y cualitativo, utilidad, características de las pruebas cualitativas y cuantitativas.

Análisis Cualitativo

El análisis Cualitativo tiene por objeto la identificación y combinación aproximada de los constituyentes de una muestra dada.

La muestra en cuestión puede ser un puro elemento o una sustancia químicamente pura o cualquier mezcla posible.

Screening (rapidez), para luego realizar la cuantificación de la sustancia a determinar.

Características de las Pruebas Cualitativas

.- Más sencillas
.- Solo indican la presencia o no de la sustancia
.- Generalmente son visibles
.- Técnicamente más rápidas
.- No cuantifican concentración, ni valores
.- Generalmente baratas
.- A veces subjetivas

Análisis Cuantitativo

Análisis cuantitativo es la determinación de la abundancia absoluta o relativa (muchas veces expresada como concentración) de una, varias o todas las sustancias químicas presentes en una muestra.[]
Una vez que se conoce la presencia de cierta sustancia en una muestra, la cuantificación o medida de su abundancia absoluta o relativa puede ayudar en la determinación de sus propiedades específicas.
Es el estudio experimental de las cantidades de sustancia que aparecen en una muestra o que intervienen en una reacción, y no solamente la identificación su naturaleza.
Fundamentales en el estudio analítico, permiten dar valores a los parámetros, necesarios para saber si la sustanciade interés está en proporciones adecuadas
Permiten establecer resultados mediante cantidades de parámetros analizados. Tiene por objetivo determinar la composición porcentual en concentración o cantidad (contaje GR, GB, concentración de glucosa, creatinina, y hemoglobina, etc.

Características de las Pruebas Cuantitativas

.- Generalmente más sofisticadas
.- Indican cantidad y/o concentración
.- Técnicamente más complejas y largas
.- La lectura del resultado esta sujeta al uso de un aparato
.- Más costosas
.- No subjetivas
  KITS
Es cualquier producto sanitario que consista en un reactivo, producto reactivo, calibrador, material de control, estuche de instrumental y materiales, instrumento, aparato, equipo o sistema, utilizado solo o en asociación con otros, destinado por el fabricante a ser utilizado in vitro para el estudio de muestras procedentes del cuerpo humano, incluidas las donaciones de sangre y tejidos, sólo o principalmente con el fin de proporcionar información:
— relativa a un estado fisiológico o patológico, o
— relativa a una anomalía congénita, o
— para determinar la seguridad y compatibilidad con receptores potenciales, o
— para supervisar medidas terapéuticas. Están destinados específicamente por el fabricante a usarse en exámenes diagnósticos in Vitro

 Etiqueta.

Trozo de papel u otro material que se adhiere a un objeto para identificarlo, clasificarlo e informar acerca del contenido de dicho objeto

Se trata de una señal, marca o rotulo que se adhiere a un objeto para su identificación, clasificación o valoración.

Elemento que se adhiere a un envase para identificarlo y/o describirlo, consta deuna serie de indicaciones

LITERATURA ADJUNTA

Inserto que acompaña a los equipos o kits de reactivos, permite instruir al usuario sobre todos los puntos relevantes del método a utilizar, además de dar aporte bibliográfico.

Ventajas y desventajas de los usos de kits comerciales.

Conjunto de reactivos preparados comercialmente, con dispositivos accesorios conteniendo los componentes principales (y literatura) necesarios para realizar uno o mas pruebas con los procedimientos diagnósticos especificados. Pueden ser para uso en el laboratorio o individua

Ventajas:
• Estabilidad
• Reproducibilidad
• Fácil manejo
• Fácil preparación, listos para usar o reconstitución
• ( Vol. reactivo x muestra
• ( Vol. Muestra
• Información detallada
• Tiempo es menor

Desventajas:
• Si son liofilizados: reconstitución.
• Generalmente son costosos.
• A veces, cuando se acaba un reactivo, se necesita comprar todo el kit.
• Muchas veces son exclusivos de un sistema analítico determinado.

Concepto de colorantes, utilidad, Wright, giemsa y azul de metileno.

Los colorantes, también conocidos como anilinas, son sustancias químicas con color, las cuales presentan la característica de ser solubles en agua o disolventes orgánicos y tener grupos reactivos capaces de fijarse a los diversos sustratos, a los cuales se unen de una cierta forma química. Se emplean para teñir y dar color a otros materiales también para teñir las células o los tejidos orgánicos, a efecto de que sean visibles al examinarlos con el microscopio.

Los colorantes especiales Permiten ver células, tejidos, microorganismos,resaltar estructuras y detalles de éstos, permiten ver sustancias o partículas que son difíciles de ver, por ser 'trasparentes', ya que la luz puede cambiar la imagen y dificultar la visibilidad de lo deseado

a– Azul de metileno.
La tincion es un método utilizado para estudiar microorganismos ya que se observa morfología, estructura y agrupamientos de los mismos. Existen diferentes tipos de tincion, en este caso , la tinción simple utiliza un solo colorante como puede ser el azul de metileno el cual se usa para observar bacterias y levaduras las cuales difieren desde el punto de vista químico de su medio exterior y por eso se tiñen contrastando con su alrededor.
Se utiliza comúnmente para tratar el parásito Ichthyophtirius Multifiliis, un parásito protozoa.

a– Wright.

La tinción de Wright es un tipo de tinción usada en histología para facilitar la diferenciación de los tipos de células de la sangre. Se usa principalmente para teñir frotis de sangre y punciones medulares, para ser examinadas al microscopio. Tiñe el citoplasma celular.

a– Giemsa.

Se emplea en Hematología para observar los elementos sanguíneos normales y en Microbiología para identificar parásitos (protozoarios de la sangre y los tejidos), espiroquetas, levaduras y hongos (Chlamydia).

Los núcleos de células y protozoarios se observan en color rojo vino, el citoplasma en color azul claro. Los eritrocitos en color gris claro.

Se emplea principalmente en frotis sanguíneos para observar a los agentes patógenos junto a las células sanguíneas y mostrar las diferencias entre ambos. Se ponen en evidencia la morfología y estructura de losmicrobios. Estas diferencias pueden ayudar al diagnóstico certero de varias enfermedades infecciosas de la sangre.

Concepto de anticoagulante, tipos de anticoagulantes.

Anticoagulante es una sustancia endógena o exógena que interfiere o inhibe la coagulación de la sangre, creando un estado prohemorrágico.

Anticoagulantes usados en Hematología
Los anticoagulantes se utilizan para obtener plasma o muestras de sangre total para estudiar las características morfológicas y realizar los recuentos celulares. Deben intentar que las células sanguíneas a estudiar se encuentren en el estado más parecido al fisiológico, como cuando se encuentran circulando por el torrente sanguíneo. Para ello los anticoagulantes no deben alterar la morfología de los leucocitos, el tamaño eritrocitario, no producir hemólisis e impedir la agregación plaquetaria, posibilitando al mismo tiempo el máximo período de conservación de la muestra (generalmente no más de 24 horas incluso refrigerada a 4° C).

Tipos de anticoagulantes:

• EDTA
(C10H16N2O8) o sal disódico, dipotásica o tripotásica del ácido etilendiaminotetraacético, actuando mediante un efecto quelante sobre el calcio (Ca++), impidiendo el proceso de la coagulación al fijarlo. Este anticoagulante se utiliza fundamentalmente para la realización de recuentos celulares, sobretodo en los autoanalizadores y permite además la realización del hematocrito y del frotis sanguíneo hasta dos horas después de la extracción de la muestra al mismo tiempo que impide la aglutinación de las plaquetas. Las sales de potasio tienen la ventaja con respecto a la de sodio, por ser más fácilmente solubles en sangre cuando lasusamos a partir del producto sólido, sin embargo , las tres sales afectan el tamaño del eritrocito, especialmente después del almacenamiento de la sangre anticoagulada por espacio de algunas horas. El International Council forstandardización in Hematology (ICSH) recomienda la sal dipotásica como anticoagulante para recolectar muestras sanguíneas destinadas al recuento y caracterización del tamaño celular y especialmente cuando los valores del hematocrito se requieren para la calibración de los contadores automáticos. El K2EDTA .2H2O posee un peso molecular relativo de 404,1g; 1g quela 100 mg de calcio iónico y el pH para una solución al 1% es de 4.8+/-1,0. La cantidad de EDTA deshidratado agregada a la sangre debe ser de 1.5-2.2 mg/ml. de sangre total. Esta cantidad es un compromiso entre la cantidad requerida para evitar la coagulación y la cantidad a la cual se producen las alteraciones celulares.

• HEPARINA SÓDICA. HEPARINA DE LITIO:

Es un anticoagulante fisiológico que actúa impidiendo que la protrombina se transforme en trombina. Estructuralmente es un mucopolisacárido ácido. Los frotis realizados con muestras sanguíneas anticoagulada con heparina producen en las tinciones panópticas un color azulado y una pseudovacuolización celular por lo tanto no se lo recomienda para tal fin. La proporción adecuada es de 15-20 UI (0.1-0.2 mg) de heparina por ml de sangre.

• CITRATO TRISÓDICO:

C6H5O7Na3, actúa impidiendo que el calcio se ionice, evitando así la coagulación. Se utiliza para realizar las pruebas de Hemostasia en una proporción sangre: anticoagulante 9:1; así como para la velocidad de eritrosedimentación en una proporciónsangre: anticoagulante 4:1. El citrato sódico se utiliza a una concentración de 0.106 mol/l (31,3 g/L de C6H5O7Na3.2H2O).

Utilidad:

EDTA

(ETILEN-DIAMINO-TETRA-ACETATO) Este tipo de anticoagulante es utilizado principalmente cuando se realizan estudios en donde se cuentran células.

CITRATO DE SODIO

Generalmente en concentraciones al 3.8 % y ser utiliza comúnmente en estudios de coagulación.

HEPARINA

Se utiliza tanto en algunos estudios de rutina como especializados. Su presentación puede incluir heparina con concentraciones de sodio o litio. En general, la heparina con tilio es utilizada para estudios de química y la heparina sódica se utiliza para estudios de linfocitos.

OXALATOS

Son anticoagulantes menos comunes, utilizados ocasionalmente en las determinaciones de glucosa.

Los tubos deben mezclarse inmediatamente, una vez que la sangre ha entrado en ellos. Invertir suavemente (10 – 15 veces) o colocarlos en rotores especiales, para así obtener mezclas homogéneas.

Existen códigos de colores internacionalmente conocidos, para los tubos que se utilizan como colectores de muestras sanguíneas.

Tapa roja…………………….. Sin anticoagulante (Tubo seco ).

Tapa violeta…………………. Con EDTA.

Tapa azul …………………… Con CITRATO DE SODIO

Tapa verde o blanca……….. Con HEPARINA.

Conclusión

Los reactivos son toda aquellas sustancia que interactúa con otra en una reacción química que da lugar a otras sustancias de propiedades, características y conformación distinta, denominadas productos de reacción o simplemente productos.

Tenemos la sustancia reactiva que se emplea para producir unareacción química que sirve para medir cantidades pertenecientes a otras sustancias. Ejemplo el mercurio. Solución reactiva es una solución de sustancias químicas o compuestos biológicos específicos, o de los dos, en un solvente también especifico. Como por ejemplo el Lugol.
Los reactivos según el reactivo critico de clasifica en categoría química, categoría enzimática y categoría inmunológica. Podemos encontrar también que existe un análisis cuantitativo y cualitativo; el cuantitativo es la determinación de la abundancia absoluta o relativa (muchas veces expresada como concentración) de una, varias o todas las sustancias químicas presentes en una muestra y el cualitativo tiene por objeto la identificación y combinación aproximada de los constituyentes de una muestra dada.
Existen Los colorantes especiales Permiten ver células, tejidos, microorganismos, resaltar estructuras y detalles de éstos, permiten ver sustancias o partículas que son difíciles de ver, por ser 'trasparentes', ya que la luz puede cambiar la imagen y dificultar la visibilidad de lo deseado. También existen los anticoagulantes que sustancias endógena o exógena que interfiere o inhibe la coagulación de la sangre, creando un estado prohemorrágico. Podemos encontrar varios tipos de anticoagulantes como: EDTA, HEPARINA SÓDICA. HEPARINA DE LITIO Y CITRATO TRISÓDICO.

BIBLIOGRAFIA

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