UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA
PRACTICAS DE LABORATORIO
UROCULTIVO
Maye Bernal Rivera
Introducción
El cultivo de la orina “Urocultivo” se solicita para determinar el agente etiológico de
infección urinaria. El urocultivo de rutina únicamente esta orientado para identificar
bacterias gram negativas y gram positivas. Si sospecha etiología por Mycobacterium
tuberculosis u otras bacterias decrecimiento exigente debe especificarse en la orden
de solicitud ya que tanto la toma de la muestra como el procedimiento en el
laboratorio son diferentes
PRACTICA DE LABORATORIO
Objetivo
Proporcionar al estudiante el conocimiento científico y las habilidades practicas de los
métodos y técnicas utilizados en Microbiología Médica para el aislamiento e
identificación del agente etiológico implicado en los procesos de infección urinaria

PARTE I. Siembra y lectura del sedimento urinario
Objetivos específicos
- Conocer las diferentes metodologías para el aislamiento e identificación del
agente etiológico en infección urinaria
- Aislar el posible agente etiológico del paciente asignado
- Realizar la lectura e interpretación del sedimento urinario
Materiales
- Muestra: Orina del paciente (Ver anexo para instrucciones de la toma de la
muestra)
- Medios de cultivo:
- Técnica No. 1 - Microcultivo de Kass: Agar Cled y Mac Conkey
- Técnica No. 2 - Hoeprich: Agar sangre y Mac Conkey
- Tubo de centrífuga, laminas y microscopio
- Micropipeta, asas bacteriológicas, mechero
- Incubadora a 37ºC
Procedimiento
Técnica No. 1 Microcultivo de Kass
- Identificar adecuadamente elcilindro que contiene la paleta con los medios de
cultivo
- Mezclar la muestra de orina y destapar el frasco
- Introducir la paleta en la orina de manera que la orina cubra completamente la
superficie de los medios
- Cerrar el cilindro herméticamente
- Incubar a 37ºC por 24 horas
- Centrifugar 10 ml de orina a 2500 rpm por 5 minutos
- Leer el sedimento urinario en 40X y anotar los resultados
Técnica No. 2 Método del asa calibrada o Hoeprich
- Identificar correctamente los medios de cultivo (A. sangre y Mc Conkey)
- Mezclar la muestra de orina y destapar el frasco
- Medir con la micropipeta 100 ul de orina y colocarlos sobre la superficie de cada
uno de los medios
- En agar sangre sembrar en cuadrícula para hacer el recuento de UFC
- En Mac Conkey sembrar por agotamiento para aislar el microorganismo
- Incubar a 37ºC por 24 horas
- Centrifugar 10 ml de orina a 2500 rpm por 5 minutos
- Leer el sedimento urinario en 40X y anotar los resultados
Actividad
1. Escriba los agentes etiológicos gram negativos urinarios mas frecuentes en
nuestro medio
2. Escriba los agentes etiológicos gram positivos urinarios mas frecuentes en nuestro
medio
3. Investigue que es el examen fraccionado de orina y su utilidad
4. Realice la orden de solicitud para el laboratorio clínico
PARTE II. Lectura e interpretación de los cultivos. Identificación
del agente etiológico.
Materiales
- Cultivos bacterianos
- Reactivos y medios para las diferentes pruebas bioquímicas
Procedimiento
Técnica No. 1 Microcultivo de Kass
- Observar si hubo o no crecimiento en el medio de kled y si hubo crecimiento
determinar si es puro o mixto yhacer el recuento de unidades formadoras de
colonias (UFC) haciendo la comparación con la tabla de lectura que trae el kit
- Observar si hubo o no crecimiento en el medio de Mac Conkey y si hubo
crecimiento determinar si es puro o mixto. Si el crecimiento es positivo realizar a
partir de una colonia de este medio las pruebas bioquímicas para la identificación
del germen aislado
Técnica No. 2 Método del asa calibrada o Hoeprich
- Observar si hubo o no crecimiento en el medio de agar sangre y si hubo
crecimiento determinar si es puro o mixto
- Hacer el recuento de UFC, contando las colonias y multiplicando por cien
- Observar si hubo o no crecimiento en el medio de Mac Conkey y si hubo
crecimiento determinar si es puro o mixto. Si el crecimiento es positivo realizar a
partir de una de las colonias de este medio las pruebas bioquímicas para la
identificación del germen aislado
Pruebas Bioquímicas para agentes gram negativos
OXIDASA
Principio
Materiales
- Cepa a estudiar
- Reactivo: diclorhidrato de tetrametil para-fenilen-diamino
Procedimiento
1. Con un palillo de madera, transferir parte del centro de una colonia a la
superficie del papel
2. Agregar una gota del reactivo y observar la formación inmediata de un
compuesto coloreado azul-morado
Resultados
- Positiva: Una prueba positiva esta dada por la aparición de un complejo azulmorado
- Negativa: la coloración queda igual a la de la colonia en estudio
- Falsas Positivas: El oxígeno atmosférico y la luz oxidan el reactivo, por lo que
la lectura debe hacerse ante de 30 segundos
BATERIA
- TSI
- LIA
- SIMONS CITRATO
- UREA
- SIM
- MR/VP
- OFGLUCOSA
Actividad
1. Realice un flujograma para la identificación de la bacteria que le fue asignada
PARTE III. Lectura e interpretación de las pruebas bioquímicas
Objetivos específicos
- Leer e interpretar las diferentes pruebas bioquímicas
- Conocer las tablas de identificación bacteriana
- Identificar género y especie del agente etiológico
Materiales
- Cultivos bacterianos
- Pruebas bioquímicas
- Reactivos específicos cuando fuere necesario
- Tabla de identificación
Procedimiento
1. Leer las pruebas bioquímicas
2. Con base en los resultados obtenidos buscar en la tabla de identificación
3. Identificar e informar el agente etiológico
Interpretación de resultados
- Si hay crecimiento en ambos medios: agar Kled o (Agar sangre) y en Mac Conkey,
quiere decir que el microorganismo aislado es un gram negativo
- Si hay crecimiento únicamente en agar Kled (o agar sangre), quiere decir que se
aisló un gram positivo
- Para que el resultado de laboratorio y el recuento de UFC tenga valides, ademas
de hacer correlación clínica debe hacerse correlación con el sedimento urinario de
la muestra procesada.
- Si se amerita hacer identificación y antibiograma si se aisla mas de un tipo de
microorganismos solicitar nueva muestra para confirmar el hallazgo
Informe al médico
Negativo: Negativo en 48 horas de incubación
Positivo: Microorganismo aislado, recuento de UFC y antibiograma
Actividad
1. Escriba las diferentes patología urinarias que puede causar el agente aislado
2. Escriba los antimicrobianos que deben probarse frente a este agente etiológico
3. Realice el informe de laboratorio dirigido al médico tratante