Objetivos:
1.- Conocer la técnica de cromatografía para la separación de distintos compuestos por ejemplo de líquido-líquido, sólido-líquido, sólido-gas, líquido-gas, y que factores experimentales les afecta.
2.-Observar el efecto que tienen las diferentes fases móviles y estacionarias en la separación, de una mezcla.
Analisis y discusión de resultados:
En la primera experiencia que realizamos, fue la cromatografía en columna en la cual utilizamos una mezcla de Hexano: Acetato de etilo (1:1) es poco polar por lo que al adicionarla en la columna, eluyeron las sustancias no polares, mientras que las polares quedaron adheridas en la sílica-gel; y al cambiar la mezcla a Acetato de etilo: Metanol (1:1) de mayor polaridad, las moléculas polares se van desplazando al reemplazarse el disolvente, hasta obtener las muestra correspondientes y necesarias en las dos extracciones.

En la cromatografía de placa fina obtuvimos dos manchas coloridas una muy cerca de la línea de inicio y otra muy cerca de la línea final, esto se debió a que nuestro eluyente reacciona de manera favorable con nuestra fase estacionaria; y al ver que nuestra mancha quedo muy cerca del otro extremo de la placa podemos decir que nuestro compuesto no es polar ya que se desplazo con gran rapidez por la placa, y por el contrario la mancha que quedo cerca de la línea de inicio es mucho mas polar que el otro punto.
Un factor de gran influencia es la polaridad de nuestro eluyente ya que esto consigue quelos compuestos se muevan mas lento o mas rapido en una cromatografía. Es decir, para un eluyente con mayor polaridad, este estara mas atraído por el soporte y los componentes seran mas libres para moverse mejor, por lo que, al revelar la placa, los componentes saldran mas alejados de la línea base. Por la misma razón, con un eluyente menos polar, este casi no interaccionara con el soporte polar, y los componentes tendran una mayor interacción con el soporte, por lo que la velocidad sera mas pequeña y al terminar la cromatografía, se habra desplazado muy poco a partir de la línea base.
Por estos factores es recomendable la elección de un buen eluyente para la separación de los compuestos que queremos. Para cada experiencia el tipo de eluyente que necesitemos, depende de los componentes a separar por lo tanto, lo mejor sera realizar varias pruebas con distintos tipos de eluyentes para así considerar el mas óptimo para nuestra cromatografía.

1.- Indicar que precauciones se deben de tener al empacar una columna de cromatografía
Desde el inicio al momento de colocar el algodón (en forma de galleta) se debe de tener la precaución para no obstruir la salida de nuestro eluato, al igual que cuando se agrega la suspensión de sílica-gel, y la mezcla de Hexano: Acetato de etilo (1:1) a la columna de cromatografía, hay que golpear ligeramente con los dedos para que el empacado sea uniforme, y hay que mantener un goteo uniforme en la llave de salida del disolvente, teniendocuidado de no dejar la sílica-gel sin disolvente. Mantener siempre el nivel del eluyente 0.5cm por arriba del nivel del adsorbente, la columna se llena hasta tres cuartas partes de su capacidad. Es importante conocer la polaridad del adsorbente para así elegir la polaridad del disolvente.

Indicar que fracciones se separaron por cromatografía en columna, de los extractos de espinaca, jitomate y cómo se identificaron.
De las espinacas se extrae: pigmentos, caroteno, clorofila a y clorofila b.; y mediante cromatografía en capa fina, obtuvimos la separación de sus componentes al pasar el disolvente por el punto aplicado, y por cromatografía en columna obtuvimos fracciones coloridas, las cuales indicaban el grado de separación.
Escriba ¿Qué conclusiones se obtienen de la cromatografía en capa fina y de la cromatografía en columna?
En la cromatografía plana la separación se realiza por distancias mientras que en columna se hace por volúmenes (de las fracciones separadas). En la cromatografía en columna la separación de varias muestras, se realiza de forma secuencial, por lo que si tenemos dos muestras cada una de ellas debera someterse individualmente al mismo proceso de introducción en la columna; en la cromatografía de placa fina por el contrario, la separación de varias muestras se puede realizar de forma simultanea, y todas ellas sometidas al mismo tiempo al proceso separativo esto supone un ahorro de tiempo considerable.
Definir los siguientes términos:Adsorción, partición, eluyente, eluato, disolventes, fase móvil, fase estacionaria,
Adsorción: Se llama adsorción al fenómeno de acumulación de partículas sobre una superficie. La sustancia que se adsorbe es el adsorbato y el material sobre el cual lo hace es el adsorbente. La adsorción se utiliza para eliminar de forma individual los componentes de una mezcla gaseosa o líquida. El componente a separar se liga de forma física o química a una superficie sólida. El componente eliminado por adsorción de una mezcla gaseosa o líquida puede ser el producto deseado, pero también una impureza. Este último es el caso, por ejemplo, de la depuración de gases residuales. El sólido recibe el nombre de adsorbente, y el componente que se adsorbe en él se denomina adsorbato. El adsorbente se debería ligar, en lo posible, sólo a un adsorbato, y no los demas componentes de la mezcla a separar. Otros requisitos que debe cumplir el adsorbente son: una gran superficie específica (gran porosidad) y tener una buena capacidad de regeneración. Un adsorbente muy utilizado es el carbón activo. La adsorción se favorece por temperaturas bajas y presiones altas
Partición: Fenómeno de reparto entre las dos fases debido a su solubilidad. La solubilidad es una medida de la polaridad y de otro tipo de interacciones moleculares.
Eluyente: Se trata de un disolvente que se usa para llevar los componentes de una mezcla a través de una fase estacionaria.
Eluato: solución o sustancia obtenida por unproceso de elución. [Elución: extracción de una sustancia absorbida desde un lecho poroso o columna de cromatografía con un disolvente adecuado]
Disolvente: Un disolvente es una sustancia que permite la dispersión de otra en su seno. Es el medio dispersante de la disolución. Normalmente, el disolvente establece el estado físico de la disolución, por lo que se dice que el disolvente es el componente de una disolución que esta en el mismo estado físico que la disolución. También es el componente de la mezcla que se encuentra en mayor proporción.
Las moléculas de disolvente ejercen su acción al interaccionar con las de soluto y rodearlas. Se conoce como solvatación. Solutos polares seran disueltos por disolventes polares al establecerse interacciones electrostaticas entre los dipolos.
Los solutos no polares disuelven las sustancias no polares por interacciones entre dipolos inducidos. El agua es habitualmente denominada el disolvente universal por la gran cantidad de substancias sobre las que puede actuar como disolvente.
Fase móvil: La fase móvil puede ser un líquido o un gas, y su función es transportar a los componentes de la mezcla a través del sistema cromatografico.
Fase estacionaria: Esta fase permanece fija y consiste en partículas, generalmente sólidas, pequeñas y con una superficie microporosa, de forma que presenta un amplio desarrollo superficial. Puede estar empaquetada en forma de columna o extendida en forma de capa. En ocasiones es necesario untratamiento químico de la fase estacionaria para conseguir unas partículas de tamaño y poro adecuados.
Es el factor de retención y es el cociente de dividir:
(Distancia recorrida por el soluto entre distancia recorrida por el disolvente. Se utiliza con fines de identificación de compuestos cando se tienen patrones de referencia).
Conclusiones
La cromatografía es una técnica muy eficiente si la comparamos con destilaciones, la cristalización, o extracciones, esto porque es aplicable a la gran mayoría de las sustancias.
La cromatografía en columna, nos permite usar una gran cantidad de la sustancia a separar, y la cromatografía en capa fina, nos permite realizar separaciones múltiples, al mismo tiempo, y sometidas al mismo proceso separativo.
La cromatografía en placa es de gran eficacia siempre y cuando como ya he mencionado antes se seleccione el eluyente indicado para la separación de los compuestos que queremos y para cada experiencia el tipo de eluyente depende de los componentes a separar y lo mas recomendable es realiza varias pruebas para localizar que eluyente es el mas indicado para realizar la cromatografía y esto puede ser una desventaja en el desperdicio de reactivos.


Bibliografía:
https://www.slideshare.net/yerga/cromatografia-de-capa-fina
Técnicas de bioquímica y biología molecular. David Freifelder. Editorial Reverté, 1991
Cap. 8: Cromatografía. Pag. 179Skoog, Douglas A. y
Leary, James J. (1994), Analisis Instrumental, Madrid: McGraw-Hill