INTRODUCCION

Generalmente las especies químicas son separadas convirtiéndolas en fases diferentes que pueden ser aisladas mecanicamente. Las diferencias que resultan del grado al cual un soluto se distribuye entre dos líquidos inmiscibles ha permitido la separación de muchas especies.
La partición de un soluto en dos fases inmiscibles es un fenómeno de equilibrio gobernado por la Ley de Distribución.
El equilibrio del soluto A al distribuirse por sí mismo en agua y fase organica es: Aac Aorg
Coeficiente partición o separación: K = [Aorg] / [Aac
Dicho coeficiente es útil para calcular la concentración del analito remanente en una solución después de cierto numero de extracciones. También indica cual es la forma mas eficiente para llevar a cabo una separación extractiva.

La levadura del pan, Saccharomyces cerevisiae, es un hongo perteneciente a los ascomicetas. Se reproduce mediante un proceso llamado gemación. Esta levadura hace que el pan crezca liberando dióxido de carbono, que queda incluido en la masa. Los egipcios fueron los primeros en descubrir que dejando fermentar la masa se producían gases, que hacían al pan mas ligero.
Las macromoléculas son moléculas que tienen una masa molecular elevada, formadas por un gran número de atomos. Generalmente se pueden describir como la repetición de una o unas pocas unidades mínimas o monómeros, formando los polímeros. A menudo el término macromolécula se refiere alas moléculas que pesan mas de 10.000 dalton de masa atómica. Las proteínas son macromoléculas formadas por aminoacidos, constituidas por gran número de unidades estructurales. Debido a su gran tamaño, cuando estas moléculas se dispersan en un solvente adecuado, forman obligatoriamente soluciones coloidales, con características que las distinguen de las soluciones de moléculas mas pequeñas.
Las proteínas son polipéptidos formados por centenares de aminoacidos, su clasificación por solubilidad es así: Albúminas (solubles en agua) Globulinas (insolubles en agua, solubles en soluciones salinas) Glutelinas (solubles en soluciones diluidas de acidos y bases) Prolaminas (solubles en soluciones alcohólicas al 70-80%)

PARTE EXPERIMENTAL

1.Se maceró 5 min una cucharadita de levadura y una de arena, se adicionó 15 mL de acido tricloroacetico 5% y maceró 3 min, se dejó asentar arena y se decantó solución lechosa a tubo centrifuga, se centrifugò a 3000rpm 5 min.

2.El sobrenadante se pasó a tubo de ensayo y el resto se colocó en baño de hielo , al sobrenadante se adicionaron 2 volúmenes de etanol frió agitando y en baño de hielo, luego se centrifugò. Se descartó sobrenadante y al precipitado se adiciono 1 mL de agua + 1mL reactivo yodo, a un tubo control se adicionó 1 mL de agua + 1mL reactivo yodo.

3.Al precipitado se adicionó 15mL NaCl 10% agitando, se pasó a tubo ensayo y se llevó a baño de agua hirviente 10min, se enfrió y centrifugò 3 min. El precipitado se llevó a baño hielo. El sobrenadante se llevó a tubo ensayo y se le adicionó 2 volúmenes etanol frío lentamente, luego se llevó a baño hielo 3 min y centrifugò 3 min. Se descartó el sobrenadante y el precipitado se disolvió en 2 mL de amortiguador salino + 3mL orcinol, como control otro tubo contuvo 2 mL amortiguador salino + 3 mL orcinol. Ambos tubos se llevan a baño hirviente.

4.Se disolvió el precipitado con 2 mL solución salina 0.15M + 1 mL solución CuSO4 +2mL NaOH 10M. El tubo control llevó 2mL solución salina + 1 mL solución CuSO4 +2mL NaOH 10M.

RESULTADOS Y DISCUSION

El macerado inicial (arena + levadura 1:1) mostró apariencia pulverulenta color café claro.
Luego de la adición del acido tricloroacetico la mezcla quedo espesa y de color similar al inicial.
Después de la centrifugación inicial se observaron 3 capas :

La última capa (al fondo) es gris oscura, corresponde a arena 20% aproximadamente. La capa intermedia es color café claro, corresponde a la levadura 50% aprox. Y la capa superior es sobrenadante amarillento traslucido 30% aprox.
Al adicionar los volúmenes de etanol frío el sobrenadante precipitó un color amarillo lechoso.
Después de la segunda centrifugación queda un precipitado color hueso en una pequeña cantidad.
Al adicionar el reactivo de yodo se presenta un color café oscuro en el precipitado (derecha) y en el blanco o control(izquierda) color naranja traslucido.
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La presencia del glucògeno permite que el indicador de yodo reaccione y muestre coloración oscura.

Al calentar el tubo con el precipitado (acidos nucleicos y proteínas) las proteínas se desnaturalizan, es decir, sufre modificaciones de sus estructuras cuaternaria, terciaria y secundaria, conservandose los enlaces peptídicos pero rompiéndose otros. Se produce ruptura de puentes de hidrogeno, interacciones hidrófobas y enlaces salinos.

Después de la tercera centrifugación se observa un precipitado color café claro 20% aprox. y un sobrenadante de 80% aprox.

Después del la cuarta centrifugación hay una sedimentación color crema (escasa) y un sobrenadante amarillo claro.

Al adicionar el reactivo orcinol el blanco o control toma color amarillo (izquierda) y la muestra un color verde esmeralda (derecha).
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Al disolver el precipitado de proteínas con la solución salina 0.15M se observa un color café claro y un precipitado al fondo.
Y al adicionar el NaOH y CuSO4 el blanco toma coloración azul (izquierda) y la muestra coloración violeta opaca (derecha) indicando presencia de proteína.

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BIBLIOGRAFIA

1.Skoog, D.A.; West, D.M.; Holler F.J. Quìmica Analítica: Separaciones analíticas por extracción e intercambio iónico. 6ª ed. México: McGraw Hill, 1995.p 482.
2.Madriñan, de G. C. Química de Alimentos: Aminoacidos y Proteínas. Colombia: Univalle, 1988. p 235-301.