Practicas de laboratorio

Practica No. 1
Frotis longitudinal, transversal de muestra de pacientes con Dx confirmado de leucemias con tinción de Wright.

Fundamento
El examen microscópico de una extensión de sangre sobre un porta o cubreobjetos de vidrio, nos permite obtener valiosa información acerca de los elementos formes de la sangre, muchos de los cuales no pueden ser evaluados mediante las mediciones cualitativas realizadas por otros métodos. En general, en un frotis podemos evaluar lo siguiente
Morfología eritrocitaria.
Concentración y distribución de la hemoglobina.
Inclusiones y artificios de los eritrocitos.
Morfología y recuento diferencial de los leucocitos.
Distribución de los eritrocitos.
Inclusiones y artificios de los leucocitos.
Morfología y apreciación cualitativa del número de plaquetas.

Artificios y agrupación de las plaquetas.

Objetivo
Realizar correctamente los extendidos sanguíneos usando diferentes técnicas.
Seleccionar la técnica adecuada identificando sus ventajas y desventajas.

Generalidades:
Un frotis de sangre es un mecanismo científico que consiste en el extendido de una gota de sangre en la superficie de un portaobjetos o de un cubreobjetos, con el fin de analizarla posteriormente.
Es más adecuado emplear sangre que aún no ha estado en contacto con el anticoagulante, pues este podría alterar los resultados (algunos anticoagulantes tienden a deformar las células de la sangre).
Su arquitectura de las células al formarse en la médula ósea.
Las alteraciones singulares en la forma de las células, que son una identificación especifican de algunas enfermedades. Algún indicadorde los efectos nocivos de la quimioterapia y de la radioterapia. La diferenciación y recuento de los elementos celulares de la sangre. La fidelidad de la información obtenida de ellos, depende en gran parte de la calidad de las extensiones.
Estas no deben ser demasiado gruesas porque las células se amontonarían y no podrían ser reconocidas, ni diferenciarse, ni demasiado delgadas porque las células se deformarían, distorsionarían y destruirían. Por eso los frotis de sangre deben ser bien nivelados y para obtener buenos resultados es necesario que
Tanto portaobjetos como cubreobjetos deben estar bien limpios y desengrasados (preferentemente nuevos). La gota de sangre usada para la preparación del frotis no debe ser muy grande ni pequeña, de preferencia del tamaño de la cabeza de un alfiler (entre 2 y 3 mm), obtenida por punción capilar.


La sangre no haya estado en contacto con anticoagulante, pues podría deformarse la morfología celular si pasase esto.
La lectura de las extensiones se hará en las zonas donde los eritrocitos 'casi se tocan'.
Para llevar a cabo las extensiones en portaobjeto se coloca una gota de sangre de 3 a 4mm de diámetro, a unos 2 o 3 cm de uno de los extremos del portaobjetos este se coloca en una superficie plana y lisa. Con el borde de otro portaobjeto, con el que se toca la gota de sangre, la cual se desliza por capilaridad a todo lo largo del canto de dicho portaobjeto y con un movimiento rápido y uniforme, en un ángulo de 45 grados se desliza el portaobjetos dejando una capa de sangre en la superficie del otro. El espesor del extendido debe ser delgado.



Material:Sangre venosa obtenida con E.D.T.A
Portaobjetos.

Frotis longitudinal
Son similares a los anteriores, con la ventaja que la distribución de las células es homogénea.
1. Colocar una gota de sangre de 2 a 3mm de diámetro en la parte media y cerca del extremo largo de un portaobjetos mantenerlo en posición horizontal sujetándolo con los dedos índice y pulgar de manera que se forma un puente, con estos dedos sobre el portaobjetos.
2. Se coloca un segundo portaobjetos haciendo un ángulo de 30o con el primero y con su mayor eje mayor perpendicular al portaobjetos horizontal, quedando la gota de sangre debajo de él y apoyándolo firmemente. Se desliza el extensor hasta hacer contacto con la sangre, la que difunde uniformemente en la superficie de contacto.
3. El portaobjetos extensor mueve en dirección opuesta hasta llegar al extremo contrario a aquel en el que se depositó la gota de sangre. En este momento se deja descansar sobre el horizontal formando los 2 portaobjetos una T, unos segundos después el extensor para que la sangre difunda uniformemente entre ambas superficies de una capa fina.
4. Cuando la sangre termine de extenderse, se separan los portaobjetos mediante un rápido movimiento, deslizándolos en el mismo plano horizontal y teniendo cuidado de no elevar ni separar ninguno de los portaobjetos.
5. Secar inmediatamente ni separar ningún de los portaobjetos.
6. Identificar la preparación.
Conclusión
Para lograr frotis excelentes es indispensable que los portaobjetos se encuentren perfectamente limpios y libres de grasas. Es importante recordar que cuando se practica una extensión desangre, se produce un proceso mecánico en las celular. Durante el proceso de tinción puede ocasionar artificios que hay que considerar al valorar la extensión. No olvidar que se debe utilizar sangre recientemente extraída ya que el anticoagulante puede ocasionar alteraciones morfológicas.

Practica No. 2
Recuento normal de la serie blanca en porciento (%)







Objetivo
Que el alumno sea capaz de reconocer las células de la serie blanca las cuales están encargadas de proteger nuestro cuerpo.

Fundamento
La tinción de Wright es un tipo de tinción usada en histología para facilitar la diferenciación de los tipos de células de la sangre. Se usa principalmente para teñir frotis de sangre y punciones medulares, para ser examinadas al microscopio. En citogenética se usa para teñir cromosomas, para facilitar el diagnóstico de síndromes y enfermedades. Lleva el nombre de James Homer Wright, su descubridor, que la obtuvo modificando la tinción de Romanowsky, en 1902.
Debido a que ayuda a distinguir fácilmente las células de la sangre se convirtió en una técnica muy usada para el conteo de los glóbulos blancos, una técnica rutinaria usada cuando hay sospecha de infecciones.
FUNDAMENTO
La tinción de Wright es una tinción de tipo Romanowsky. Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación, así como eosina Y o eosina B La acción combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky que da una coloración púrpura a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrofílicos y da color rosado a los eritrocitos.
Los componentes de este efecto son el azul B y laeosina Y Las propiedades de tinción de Romanowsky dependen del enlace de los colorantes a las estructuras químicas y de las interacciones del azul B y la eosina Y. Los agrupamientos de ácidos nucleicos, las proteínas de los núcleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo, fijan el azul B, colorante básico. La eosina Y, colorante ácido, se fija a los agrupamientos básicos de las moléculas de hemoglobina y a las proteínas básicas. Glóbulos blancos teñidos con colorante de Wright


Generalidades
Los leucocitos o glóbulos blancos son células que están principalmente en la sangre y circulan por ella con la función de combatir las infecciones o cuerpos extraños, pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales del propio cuerpo. Es una parte de las defensas inmunitarias del cuerpo humano.
Se llaman glóbulos blancos, ya que este color es el que su aspecto al microscopio. Hay diferentes grupos de glóbulos blancos: los llamados polimorfo nucleares (neutrófilos, eosinófilos y los basófilos) y los mononucleares (los linfocitos y monocitos).
El origen de todas las formas de leucocitos es a partir de células madres de la medula ósea.

Material
1. Portaobjetos
2. Torundas
3. Ligadura
4. Microscopio
5. Buffer
6. Colorante de Wright
7. Gradilla

Técnica
1. Se extraen 3 ml de sangre con el equipo de bacutainer con tubo de color morado.
2. Se realiza un extendido sanguíneo.
3. Se tiñe con colorante de Wright por 6 minutos.
4. Una vez terminado el tiempo se agrega buffer por 10 minutos.
5. Después del buffer se lava con agua de la llave.
6. Por último se observa a 100 X con aceite deinmersión.


Resultados:

Linfocitos: 30%
Monocitos: 2%
Basófilos: 0%
Eosinófilos: 2%
Neutrófilos en banda: 66%
Neutrófilos segmentados: 0%

Bibliografías:
http://dioscosadeloshombres.blogspot.mx/p/serie-blanca.html

Practica No. 3
Recuento de plaquetas en cámara de neubauer


Fundamento:
La muestra de sangre se diluye lo suficiente para poder contar cifras legibles utilizando un líquido de dilución isotónico que permita además identificarlos adecuadamente, impidiendo la aglutinación y la hemolisis y destruya otros elementos que pudieran interferir en el recuento, que se realiza en la cámara de Neubauer, cuya capacidad conocida.

Objetivo
Realizar e interpretar la técnica para la cuenta de trombocitos o plaquetas en la cámara de Neubauer.

Generalidades
Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo hemostático del cuerpo. Son cuerpecillos hialinos incoloros que miden de 2-4 μ, de bordes irregulares, pero pueden tener forma esférica u ovalada, carecen de núcleo y son muy frágiles. Provienen de una célula gigante que mide de entre 50-100 μ de diámetro llamada megacariocito.
Una de las principales funciones de las plaquetas es participar en los mecanismos de la hemostasia (Hemos=sangre, stasis=detención) adhiriéndose entre ellas y a las paredes de los vasos sanguíneos lesionados, para formar así el trombo plaquetario o tapón hemostático.


Material:
Pipeta de Thoma para glóbulos rojos (perla roja)
Equipo para venopunción (Tubo lila)
Boquilla
Tubo con EDTA
Tubos de ensaye
Papel parafilm
Cámara de Neubauer
Cubrehematimetro
Microscopio
Gasas Caja de Petri
Papel filtro

Sustancias:
Alcohol al 70%
Sangre venosa
Diluyente de plaquetas
Técnica:
1. Obtener 10 ml de sangre venosa, en un tubo con anticoagulante EDTA
2. Agitar la sangre de manera suave en el tubo para mezclarla con el anticoagulante
3. Llevar la sangre hasta la marca 1.0 de la pipeta de Thoma. Limpiar la punta con una gasa.
4. Aforar con liquido diluyente de plaquetas hasta la marca 101 de la pipeta (Dilución 1:100).
5.    Tapar los extremos con papel parafilm y mezclar durante 1 minuto.
6.    Colocar la Cámara de Neubauer sobre una superficie horizontal y poner el cubrehematímetro sobre las mesetas.
7.    Descartar las primeras 4 gotas de la pipeta. Con la quinta gota cargar la cámara, depositándola entre la meseta y el cubrehematímetro y dejarla difundir por capilaridad, teniendo cuidado de que no se formen burbujas o se derrame el líquido hacia los surcos.
8.    Colocar la cámara de Neubauer ya cargada en el interior de una caja de Petri, con papel filtro humedecido en agua para evitar la evaporación, dejar en reposo de 10 a 15 minutos.
9. Se observa al microscopio y se cuentan 5 cuadrantes del retículo de Thoma
10. Se informan en número de plaquetas /mm3

Resultados:
Paciente: Flores Guzmán Iván Alberto Edad: 17 años Sexo: Masculino
Conteo por cuadricula: Resultado: 342,000 /mm3
1 – 68 (N) (20) (10) (400) (N) (1000)
2 – 71 80
3 – 59 valores de referencia:
4 – 82 200,000---- 500,000 mm3
5 -- 62









Practica No. 4
Recuentro de plaquetas de frotis sanguíneo












Fundamento:

Las plaquetas son fragmentos de células de 2 a 4 micras de diámetro, son de color azul con gránulos púrpura centrales. El recuento de plaquetas se basa en la observación en un frotis de sangre y el conteo de las plaquetas en 10 campos del mismo, en una zona donde los glóbulos apenas se toquen entre sí y en número sean más o menos cien. Se hace la sumatoria de las plaquetas contadas en los 10 campos y se realiza el promedio y este resultado se multiplica por 22.000. El resultado se informa como número de plaquetas/mm3.

Objetivo

Que el alumno pueda diferenciar y hacer un conteo de calidad y eficacia al momento que se requiera o deba leer una frotis sanguíneo especificándose en buscar trombocitos.

Generalidades:

Las plaquetas, o trombocitos (del griego θρόμβος — «coagulo» y κύτος — «célula»), son fragmentos citoplasmáticos pequeños, irregulares y carentes de núcleo, de 2-3 µm de diámetro,1 derivados de la fragmentación de sus células precursoras, los megacariocitos; la vida media de una plaqueta oscila entre 8 y 12 días. Las plaquetas juegan un papel fundamental en la hemostasia y son una fuente natural de factores de crecimiento. Estas circulan en la sangre de todos los mamíferos y están involucradas en la hemostasia, iniciando la formación decoágulos o trombos.
Max Schultze (1825-1874), un anatomista alemán, marcó la historia del descubrimiento de las plaquetas.10 Sin embargo los glóbulos rojos, o eritrocitos, ya eran conocidos desde vanLeeuwenhoek, Schultze fue primero en publicar una descripción de las plaquetas.11 Él describió 'esférulas' mucho más pequeñas que los eritrocitos que ocasionalmente se agrupaban y participaban en colecciones defibrina, recomendando estudios adicionales sobre estos hallazgos.
Giulio Bizzozero (1846-1901), aportó sobre los hallazgos de Schultze, usando 'circulación en vivo' para estudiar las células sanguíneas de anfibios microscópicamente. Él notó especialmente que las plaquetas se agrupaban en el sitio de lesión vascular, un proceso que precedía a la formación de un coágulo. Esta observación confirmó el papel de las plaquetas en la coagulación.12
El hematocrito es un examen de sangre que mide el porcentaje del volumen de toda la sangre que está compuesta de glóbulos rojos. Esta medición depende del número de glóbulos rojos y de su tamaño.
El hematocrito casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguíneo completo (hemograma).
Parámetros plaquetarios. El CH convencional no ha considerado el estudio de las plaquetas como parte integral del mismo, el CH electrónico no solo a recuperado el recuento plaquetario, sino que ha aportado nuevos parámetros que han demostrado ser de utilidad clínica. Los parámetros plaquetarios de nuevos hemogramas son

•Recuento de plaquetas los nuevos parámetros plaquetarios son importantes en diferentes entidades clínicas como alteraciones en el recuento de plaquetas pro infección y en los estados anémicos. El recuento de plaquetas por medios electrónicos se caracteriza por su alto grado de precisión (CV 4%) comparado con el de los métodos convencionales (hasta mas de 60%) Volumen Medio Plaquetario (VMP).Es el tamaño de la plaqueta expresado en la unidad de volumen fl. su resultado promedio es la medida electrónica del tamaño de unas 3000 plaquetas. La utilidad clínica, está en la clasificación etiológica de las diferentes alteraciones plaquetarias como trombocitopenicas y no trombocitopenicas.
•Ancho de distribución de las plaquetas (ADP): Presenta el coeficiente de variación en el tamaño de las mismas. El ancho de distribución de las plaquetas desde el punto de vista morfológico, representa una forma electrónica de cuantificar el tamaño plaquetario.
•Plaquetocrito (Pto): Equivalente al Hto., se define como la relación entre el volumen de la masa de plaquetas con la masa total de la sangre. Refleja la concentración de las plaquetas, mas no la masa total de estas. El plaquetocrito se obtiene para cálculos matemáticos que relacionan el número de plaquetas por volumen y tamaño de las mismas.
•Histograma de plaquetas: Se define como plaquetas las partículas con volumen entre 2 y 20 fl. El histograma plaquetario es más sensible para determinar las trombocitopatias que los estudios convencionales de visión directa en los extendidos de sangre periférica.

Material:
Sangre periférica
Torundas
Aguja y dedo de vacutainer
Ligadura
Portaobjetos y cubreobjetos
Colorante Wright

Técnica

a) Colocar una gota de sangre (de alrededor de 2-3mm de diámetro) en un extremo del portaobjetos. El tamaño de la gota es importante: si es demasiado grande crea un extendido muy largo o muy grueso y si es demasiado pequeña a menudo forma un extendido corto o delgado.

b) Sostener elportaobjetos extensor (frotadora) con firmeza con la mano dominante a un ángulo de 30-45s y llevar hacia atrás hasta tocar la gota de sangre, dejando que ésta se esparza en todo el ancho del portaobjetos.
c) Empuja con rapidez y suavidad hacia delante hasta el final del portaobjetos para crear el extendido. Es importante que toda la gota se incluya en el extendido. En la figura 2 se muestra un extendido correcto y las formas inaceptables.

Consideraciones:

a) El movimiento demasiado lento del portaobjetos extensor produce una mala distribución de los leucocitos porque desplaza las células más grandes, como los monocitos y los granulocitos, hacia el final y los lados del extendido.

b) Es esencial mantener una presión pareja y suave sobre el portaobjetos para evitar la formación de gradas en el extendido. Es fundamental mantener el mismo ángulo a lo largo de todo el extendido.

c) En el caso de hematocritos superiores a lo normal, como ocurre en los pacientes con policitemia o en los recién nacidos, el ángulo debe reducirse (a aproximadamente 25s), de forma que el extendido no sea demasiado corto y grueso. En cambio, para los hematocrito muy bajos, como el que se presenta en pacientes renales, puede ser necesario aumentar el ángulo.

d) Si se hacen dos o tres extendidos, se elige el mejor para teñir y los otros se descartan de forma adecuada. Algunos laboratorios hacen dos extendidos buenos y guardan uno sin teñir para el caso de que se necesite otro preparado.

Tinción del frotis sanguíneo

a) Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la sangrehacia arriba.

b) Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el colorante de Wright gota a gota. El colorante deberá cubrir completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes. Deberá agregarse una cantidad adicional si éste se comienza a evaporar. Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos.

c) Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright, para evitar la coloración débil. Esperar la formación de brillo metálico. Puede usarse de igual manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos.

d) Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente un aspecto rosado al examinarlo a simple vista.

e) Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodón humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante.

f) Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersión.

Resultados

342,000/mm3

Retracción de Coaguló



Objetivos
1. Justificar la utilidad de la prueba de retracción del coagulo.
2. Ejecutará correctamente la técnica de retracción del coagulo.


Generalidades

El tapón hemostático de plaquetas que se forma como resultado de la hemostasia primaria, crece hasta que consigue cerrar la abertura en el vaso. Durante este tiempo, las plaquetas del tapón metabolizan glucosa y producen atp de late energía este inicia lacontracción de una proteína de las plaquetas parecida a la actinomiosina llamada trombastenia que es la causante de la retracción del coagulo. Esta retracción ocurre una vez estabilizado el coagulo, por contracción de las proteínas fibrilares del cito esqueleto plaquetario, de las glicoproteínas receptoras de membrana de la propia fibrina, el coagulo que se retrae queda firmemente adherido a la pared vascular.
Al contraerse el coagulo los hilos de fibrina se contraen gradualmente y expulsan el plasma del coagulo, aunque se retienen eritrocitos, plaquetas y otros elementos sólidos. El plasma expulsado del coagulo tiene poco o nada de fibrinógeno porque se ha convertido en fibrina y se llama suero. Para que ocurra retracción máxima del coagulo, la sangre debe poseer número adecuado de plaquetas.


Fundamento
Al coagularse en forma espontánea la sangre, se forma una masa solida con todos los componentes sanguíneos. Con el tiempo, la acción de las plaquetas sobre la red de fibrina retrae el coagulo reduciendo su masa.


Material y aparatos:

• Tubos de centrifuga de 10 ml graduados.
• Tapón de hule para los tubos con alambre de cobre de un mm de grosor con el extremo distal enroscado unas 10 vueltas.
• Jeringa de 10 ml con aguja del #22 desechable.
• Torundas de alcohol al 70%.
• Baño maría.


Material biológico
• Sangre venosa obtenida con citrato de sodio.

Técnica :

1. En el tubo de centrifuga graduado, colocar 5 ml de sangre venosa recientemente extraída.
2. Tapar con el tubo de hule el tubo introduciendo el alambre de cobre hasta el fondo del tubo .
3. Incubarlo en baño maría a37°C, durante una hora.
4. Transcurriendo ese tiempo, sacar cuidadosamente el alambre con el coagulo adherido, permitiendo que el plasma escurra dentro del tubo durante unos 2 minutos.
5. Leer el volumen que queda en el tubo y anotarlo como porcentaje con relación del volumen total de sangre inicial. Utilizando una regla de tres, de la siguiente manera

Volumen inicial
5 ml ________ 100%

Volumen liquido
Exudado ________ X


Conclusión :
Es una prueba gruesa para medir la capacidad de las plaquetas para retraer el coagulo, aunque también es influida por el fibrinógeno y por el hematocrito.


Valores de referencia
Con este método la retracción del coagulo tiene como valores de referencia de 40 a 65%.

Resultados .

3ml/5ml x 100 = 60%

Emmanuel W. García Huesca .





Practica# 6
Tiempo de Coagulación .

Objetivo
Al término de la práctica el alumno:
1. Ejecutará correctamente la determinación del tiempo de coagulación en sangre total por el método de Lee-White y método capilar.
2. Identificara la utilidad diagnostica y las limitaciones de tiempo de coagulación.


Generalidades:
A la transformación de fibrinógeno en fibrina se le llama coagulación, por que se pasa de un estado líquido (fibrinógeno) a solido (fibrina).esta transformación ocurre en 3 fases, en la primera se desarrolla actividad de tromboplastina por acciones de factores de coagulación en la sangre y por adición de jugos y plasma tisulares. Los sistemas sanguíneos (intrínsecos) y tisulares (extrínsecos) son los responsables del desarrollo de la actividad de tromboplastina, ambos funcionan en defensafisiológica de la hemostasia.
El sistema intrínseco. Se denomina así porque es iniciada a través de estimulación de factores aislados que se encuentran en el propio plasma y cuyas reacciones culminan con la generación de fibrina. Comienza con activación del factor XII que puede ser iniciado por múltiples actividades como colágena, fosfolípidos, liposacaridos, etc. El factor XII tiene capacidad de activar otras moléculas del factor VII y de precalicreina; con esto la reacción se hace expansiva. En presencia del calcio se activa el factor XI, con lo que continua el proceso. El factor XI activado en presencia de calcio, actúa sobre el factor IX activándolo, y junto con el factor 3 plaquetario, calcio y el factor VIII se forma el complejo activador del factor X
El sistema extrínseco: se inicia como respuesta a estimulación extrínseca a la sangre, como la tromboplastina tisular.
Cuando la sangre entra en contacto con la tromboplastina tisular, el factor VII forma un complejo enzimático con los fosfolípidos tisulares. Mediante iones calcio y adquiere actividad enzimática capaz de activar el factor X
La segunda fase de coagulación es la conversión de protrombina en trombina. Se inicia con el factor X activado por cualquiera de los sistemas intrínseco y extrínseco, y con el factor V, factor 3 plaquetario y calcio integra otro complejo que tiene acción sobre la trombina, por lo que actúa sobre ella convirtiéndola en trombina
La tercera fase de la coagulación sanguínea es la conversión del fibrinógeno en fibrina por acción de la trombina.


Fundamento
El tiempo necesario para que la primera sangre secoagule en tubo de crista es la medida de la actividad total des sistema intrínseco de la coagulación. La inspección periódica del coagulo permite la valoración de las propiedades físicas del coagulo (tamaño, aspecto y fuerza mecánica).


Material y aparatos
• Capilares sin heparina (orilla azul)
• Lancetas estériles
• Jeringa de plástico de 5 mililitros
• Cronometro
• 3 tubos de ensayo
• Torundas con alcohol (70%)



Material biológico
• Sangre obtenida con jeringa.
• Sangre obtenida por punción capilar.


Técnica :
• Método de Lee-White:
1. Colocar 3 tubos de 13 x100 mm en el baño maría a 37°c.
2. Obtener 5 mililitros de sangre venosa por una punción limpia y extraída con una jeringa de plástico. Con el máximo cuidado de evitar que la sangre se espume
3. Colocar 1ml de sangre en cada tubo numerado del 1 al 3.
4. Poner en marcha el cronometro cuando la sangre entra en el tubo numero 1.
5. Cada 30 segundos se inclinan suavemente los tubos hasta que se vea un coagulo en uno de ellos; se para el cronometro en ese momento y se calcula el tiempo.


• Método capilar
1. Limpiar la zona de punción con una torunda con alcohol (de preferencia el pulpejo del dedo anular).
2. Dejar que el alcohol seque.
3. Puncionar hasta la profundidad de 3 mm. Con una lanceta estéril. Poner en marcha el cronometro.
4. Se desecha la primera gota de sangre, a continuación se llena el capilar sin heparina hasta las dos terceras partes.
5. A partir del tercer minuto de la punción, se invierte el capilar constantemente hasta observar que no haya desplazamiento de lasangre. Si es necesario, se rompe el capilar para observar el tiempo en que se forman los hilos de fibrina o en su efecto, tratar que una gota de la punta caiga sobre un papel, para poder observar si se observa un hilo entre el capilar y el papel.
6. Si ya no hay desplazamiento o se observan los primeros hilos de fibrina, es el momento en que se detiene el cronometro.


Conclusión :
El tiempo de coagulación sanguínea es una prueba muy poco sensible y nunca se debe utilizar como prueba selectiva. Se usa a menudo para guiar a la terapéutica heparinica, pero los resultados obtenidos son a menudo inseguros, por esto son preferibles pruebas como el tiempo de tromboplastina parcial activa.


Valores de referencia
• Método de Lee-White oscila 4 a 8 minutos.
• Método capilar de 5 a 10 minutos.


Resultado :

1erTubo: Tiempo de coagulación 4min
2doTubo: Tiempo de coagulación 6min.




























Practica # 7
Fragilidad Capilar

OBJETIVO
Realizar la fragilidad capilar y observar la parición de petequias para determinar si el paciente puede llegar a tener hemorragias.

FUNDAMENTO
La fragilidad capilar depende del estado del endotelio vascular, si éste se encuentra en mala forma la fragilidad es mayor. Se sabe que existe relación directa entre el estado del endotelio y la cantidad de plaquetas presentes, ya que si existe fragilidad capilar por lo tanto, hay un bajo número de plaquetas.

GENERALIDADES
Agentes mecánicos, aumentos de presión, etc., en determinadas circunstancias provocan efracciones o rupturas de lasparedes capilares, que se manifiestan en forma de pequeños puntos hemorrágicos visibles a veces a través de la piel. Estas pequeñas hemorragias, denominadas petequias, a veces aparecen de forma espontánea en casos de gran fragilidad capilar como sucede en enfermedades conocidas con el nombre de púrpuras, cuya causa puede ser infecciosa, alérgica, carencial. Etc. Esta resistencia capilar a la efracción (fragilidad capilar), se puede manifestar con facilidad mediante la prueba conocida con el nombre de Rumpel-Leede o prueba del lazo.
La práctica consiste en someter el brazo del paciente a una presión entre la sistólica y la diastólica, durante un tiempo determinado, si existe fragilidad en sus capilar es por la presión sostenida ocasionará extravasación de sangre por ruptura de los mismos, manifestándose con petequias.
Debido a esa fragilidad, frente a mínimos traumatismos muchas veces inapreciables, se produce una rotura de pequeños capilares de la piel que originan una sufusión hemorrágica (hematoma o cardenal).
Los valores aumentados indican una coagulación intravascular difusa, disminución de fibrinógeno, disminución de la trombina, deficiencia del factor VII, enfermedad de Von Willebrand, trombocitopena, trombo astenia, deficiencia de vitamina K
Interpretación:
Las manchas petequiales comienzan a formarse en el tercio superior del antebrazo por la cara anterior y en individuos con resistencia normal, se manifiestan exclusivamente unos pocos puntos en esa zona. Según la intensidad y extensión de las petequias, podemos hablar de cuatro grados de fragilidad capilar.

Fundamento:

Mantener elbaumanometro en el braso por 5 min y detectar las petequias que se forman en la piel en un lapso de 5-15 minutos.


Material :

Baumanometro
Lapicero
Cronometro

Técnica:

1. Se dibuja un pequeño circulo de 2.5cm de diámetro en la cara interna del antebrazo a unos 4cm por debajo del pliegue del codo señalando las marcas que puedan confundirse con petequias.
2. Se coloca el manguito esfinge manometro y se insufla , hasta el punto medio entre la presión sistólica (80 y 100 mm de m.m.h.g) Esta presión se mantiene durante 5 minutos después de lo cual se quita el manguito.
3. Examinar el área dentro del circulo y contar las petequias que se hayan formado dentro de el : Esta debe hacerse de 5-15 min después de haberse quitado el manguito.
4. Ocasionalmente sucede que no aparecen petequias en el circulo pero se encuentran en toda la superficie del antebrazo , pliegue del codo y manos ; En este caso se da la prueba como positiva pero sin mencionar el numero de petequias , Interpretando la intensidad de la respuesta en cruces de 1 a 1 *


Conclusión:
En esta prueba se vera como la fragilidad capilar de la piel es reflejada en la cantidad de petequias formadas en la zona donde se pone el manguito y debajo de ella donde estará localizado el circulo .



Valores de Referencias :



Cifras Normales hasta 10 petequias .
Dudosa hasta 15 petequias .
Anormales Mas de 15 petequias .





Resultados :

Gysselle Zuviri Ladrón de Guevara.

11 Petequias Dudosa .




Practica# 8
Tiempo de Sangría .

Objetivo
Al terminar la práctica el alumno será capaz de:
1. reconocer lautilidad clínica de la medición de sangrado
2. ejecutar correctamente la técnica de tiempo de sangrado
3. conocer 2 técnicas para la medición del tiempo de sangrado


Generalidades:
Cuando existe una lesión vascular, por reflejo nervioso y espasmo muscular del vaso, sobreviene una contracción del mismo, fenómeno que dura segundos y tiene como finalidad lograr la estasis de la circulación y favorece la formación del tapón plaquetario.
En lesiones de capilares, esta vasoconstricción, refleja es suficiente para permitir la adhesión plaquetaria y la detención de la hemorragia.
El tapón hemostático plaquetario primario es una masa de plaquetas que se acumulan en el punto lesionado de la pared vascular, como resultado de su adherencia, al colágeno del tejido su endotelial que ha quedado expuesto (adhesión) y luego entre sí (cohesión y agregación). Los tapones primarios son inestables y fácilmente eliminados.
Un tiempo de sangrado normal indica una retracción normal de los capilares y la existencia de un número suficiente de plaquetas, con actividad normal.


Fundamento
Al realizar una punción de tamaño y profundidad estandarizados, la acción conjunta de los vasos y plaquetas detendrá el sangrado en un corto tiempo, el cual es medido y comparado con el normal.


Material y equipo
• Lancetas estériles
• Torundas de algodón con alcohol (70%)
• Papel filtro
• Un Cronometro



Técnica :

• Método de Duke:
1. selecciona uno de los lóbulos de la oreja del paciente (que esté libre de lesiones), dar un masaje suave (esto favorece a la circulación) hasta que la zona este tibia.
2. limpiarel lóbulo de la oreja con una torunda de algodón con alcohol dejar secar la región limpiada.
3. se hace una punción con la lanceta en el sitio elegido, al mismo tiempo echar a andar el cronometro. La punción debe hacerse en un solo movimiento, y sin hacer movimientos laterales para no rasgar la piel.
4. sin tocar la piel ni comprimir se seca la vota de sangre que salga por el sitio de la punción con papel filtro cada 15 segundos.
5. cuando el papel filtro ya no absorba sangre parar el cronometro.
6. anotar el tiempo.



Punción Capilar

1.    Una vez seleccionada la zona, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, secar con algodón estéril.
2.    Punzar la piel con una lanceta estéril desechable (2 mm de profundidad).
3.    La primera gota de sangre se deja perder, limpiándola con la gasa sin tocar la zona pinchada
4.    Se espera a que caigan más gotas, sin exprimir el área pinchada porque eso diluiría la sangre con líquido extracelular. Se recogen las gotas de sangre necesarias sobre El papel filtro.



Conclusión :
El tiempo de sangrado es una prueba de pantalla para los desórdenes cualitativos y cuantitativos de las plaquetas y para la enfermedad de von willebrand, independientes de los mecanismos de coagulación, aunque en los daños severos de estos, también suele resultar prolongado.
El tiempo de sangrado anormal es evidente de defecto en la fase paquetería y/o en fase vascular.


Valores de referencia:
• Método de duke  1 a 3 minutos
• Método de IVY  2 a 6 minutos


Resultados :

Gysselle Zuviri Ladrón de Guevara

· 6 Gotas