HEMATIMETRIA


COMO USAR ESTA GUÍA

Esta guía de estudio contiene material teórico necesario para la adecuada realización de las prácticas de sangre del curso de morfofisiologia; es necesario estudiar esta guía antes de llegar al laboratorio. Contiene además información ampliada sobre los tópicos de la hematimetría dentro del contexto de la fisiología sanguínea.Esta información es muy importante para su conocimiento y será evaluada en su debida oportunidad. Se recomienda conservar este material el cual será de utilidad en cursos y semestres posteriores

I. SERIE ERITROCITARIA

La hematimetría se define como el conjunto de técnicas y procedimientos para cuantificar los diversos componentes celulares de la sangre, así como las características fisicoquímicas de esta o sus fracciones.

Los parámetros hematimétricos más importantes son.
až¢ Velocidad de sedimentación globular
až¢ Hematocrito
až¢ Hemoglobinemia
až¢ Conteo eritrocitario
až¢ Índices eritrocitarios
až¢ Conteo de reticulocitos
až¢ Conteo leucocitario total
až¢ Fórmula blanca diferencial
až¢ Conteo plaquetario
až¢ Índices plaquetarios
La agrupación de estos parámetros hematimétricos, excepción hecha del recuento de reticulocitos, conforma el llamado cuadro hemático, el cual, sin duda, constituye unos de los procedimientos paraclínicos más usados y de mayor utilidad diagnóstica; sin embargo, la interpretación del cuadro hemático dista mucho de ser sencilla debido a la multitud de factores determinantes de cada uno de los parámetros
De los parámetros, mencionados, los seis primeros hacen relación a los glóbulos rojos, por lo que se agrupan bajo el término de serié eritrocitaria. Consecuentemente, lo dos siguientes conforman la serie leucocitaria y los dos últimos la serie plaquetaria.ANTICOAGULANTES QUE SE USAN PARA PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO

La determinación de los parámetros hematimétricos mencionados arriba implica la sangre se mantenga en estado líquido para poder ser procesada, es decir, que se impida la coagulación fisiológica. Para, este efecto se utilizan in vitro varios anticoagulantes, aquí entre los cuales tenemos

A. Oxalato de amonio y oxalato de potasio:
Estos se usan en una mezcla que contiene tres partes del primero y dos partes segundo. Este anticoagulante permite utilizar la sangre para determinación de hemoglobina, hematocrito y conteos globulares. El plasma puede separarse y ser usado para varias determinaciones químicas. Este anticoagulante (mezcla de oxalatos) tiene el inconveniente de no preservar bien la morfología globular ni las plaquetas.

B. Oxalato de potasio
Se usa frecuentemente en química clínica: 0.01 ml de una solución al 30% (p/v) por cada 1.0 ml de sangre.

C. Citrato de sodio:
Se utiliza una solución al 3.8% que es isotónica, en la proporción de una parte de solución de citrato por nueve de sangre en la investigación de los mecanismos de coagulación( p.ej. determinación de tiempo de protrombina) y de una parte de anticoagulante por cuatro de sangre en la determinación de la velocidad de sedimentación globular(v.s.g.) por el método según Westergreen

D. Ácido Cítrico-Citrato-Dextrosa(ACD), Citrato-Fosfato-Dextrosa(CPD) y Citrato-Fosfato-Dextrosa-Adenina(CPDA)

Se utilizan como anticoagulantes para la preservación de sangre en condiciones de Banco de Sangre para fines transfusionales

E. E.D.T.A.:
Esta es la sal di potásica del ácido etilendiaminotetra-acético. Es anticoagulante que actúa quelando el calcio. Su uso proporciona la determinación de hemoglobina; hematocrito, v.s.g., recuentos globulares y morfologíaglobular Permite también la preservación de las plaquetas ya que impide su adhesión. Es el anticoagulante de elección para hematimetría.
F. Heparina
Este es el único anticoagulante fisiológico. Se usa para determinaciones en las cuales es necesario evitar al máximo la hemólisis, p Ej. en la gasometría sanguínea. Se usan 0 mg por cada 1.0 ml de sangre. De todos los anticoagulantes aquí mencionado único que puede usarse también in vivo.
La mayoría de estos anticoagulantes actúan impidiendo que el calcio quede libre en solución para actuar en el mecanismo, de la coagulación fisiológica, bien precipitándolo como una sal (oxalatos), o bien formando un complejo no ionizable (citrato y EDTA). La heparina actúa como cofactor de una proteína plasmática, la Antitrombina III, la cual es capaz de inhibir la acción de la trombina y de otras proteasas de la coagulación el factor Xa.

ÍNDICES HEMATIMÉTRICOS

El avance experimentado en los últimos años en el desarrollo de contadores hematológicos de elevada complejidad, permite al laboratorio Clínico actual, orientar con un alto grado de certeza sobre distintas patologías eritrocitarias.
Su ventaja radica en que la medición de las partículas por su tamaño, brinda una medida más exacta del número de células (recuento de glóbulos rojos y plaquetas), como asimismo la medida del hematocrito y la hemoglobina son altamente reproducibles.
Estos valores relacionados entre si, permiten formular con mucha precisión, los llamados índices hematimétricos, que nos orientan con gran fiabilidad sobre las características de los glóbulos rojos y son de alta utilidad clínica en el diagnóstico y clasificación de las anemias.
Los índices Hematimétricos más aceptados son
1. V.C.M. o M.C.V.(Volumen Corpuscular Medio). Es una expresión, en términos absolutos, delvolumen promedio de los eritrocitos. Los valores de referencia oscilan entre 80 y 100 micrones cúbicos (u3). Valores superiores a 100 u3 indican MACROCITOSIS y menores a 80 u3 MICROCITOSIS. Para calcular el VCM se utilizan el hematocrito y el conteo eritrocitario aplicando la formula
Hematocrito (en porcentaje
VCM = -------- ----- ------ ------------x 10
Conteo eritrocitario (en millones, ul)


2. H.C.M. o M.C.H. (Hemoglobina Corpuscular Media). Es la cantidad promedio de hemoglobina que contiene cada eritrocito. Los valores de referencia están comprendidos entre 27 y 32 picogramos (pg). Valores inferiores a 27 pg se observan en anemias microciticas y valores superiores a 32 pg en anemias macrociticas. Según se expresa en la fórmula HCM (picogramos, pg) = hemoglobina (g/dl) /núm. hematies/nl x 10


3. C.H.C.M.o M.C.H.C (Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media). Indica la concentración de hemoglobina promedio por unidad de volumen (100ml)de hematíes agrupados. Los valores de referencia están comprendidos entre 31 y 36 % (o gr/ml de hematíes). Una CHCM disminuida indica que una unidad de volumen de hematíes agrupados contiene menos hemoglobina de lo normal, o que la misma sido sustituida por estroma eritrocitario, como ocurre en las anemias macrociticasy en la deficiencia de hierro. Una CHCM elevada indica esferocitosis. Esta concentración se calcula como CHCM (g/dl) = Hemoglobina (g/dl) / hematocrito (l/l).




4. R.D.W Red Distribution Width) Amplitud de distribución de los hematíes. Se refiere a la amplitud de la curva Gausiana de distribución de hematíes o expresado de otro modo, es el coeficiente de variación-CV%- que presenta dicha curva. La misma manifiesta el grado de anisocitosis que presentan los eritrocitos. Los valores dereferencia oscilan entre 12 y 16 %.
Es importante destacar que los resultados de estos índices, requieren que el error en las mediciones de glóbulos rojos, hematocrito y hemoglobina sean sensiblemente inferiores a (+), (-) 5%. Esto solo se logra con contadores electrónicos diferenciales automáticos y usando calibradores para los mismos de muy buena calidad.
Con estos valores podemos establecer una Clasificación Morfológica de las Anemias, clínicamente útil y ampliamente aceptada:
• En base a V.C.M., H.C.M., y C.H.C.M.
a) ANEMIA MACROCITICA NORMOCRÓMICA
Valor promedio encontrado: VCM:95-160 u3 (mayor que el normal)HCM:32-50 pg (mayor que el normal)CHCM:32-36 % (normal)
Causas posibles: Formas Megaloblasticas: deficiencia de vitamina B12 o ácido fólico, secundarias anomalías gastrointestinales, gastrectomía, enfermedad hepática, empleo de anticonvulsivantes, antimetabolitos y anticonceptivos orales, deficiencia dietética. Formas No Megaloblasticas: hemorragias, enfermedades hepáticas crónicas, hipotiroidismo.
b) ANEMIA NORMOCITICA NORMOCRÓMICA
Valor promedio encontrado: VCM: 80-95 u3 (normal)HCM: 27-32 pg (normal) CHCM: 31-36 % (normal)
Causas posibles: Hemorragias repentinas Anemias hemolíticas: por agentes infecciosos, químicos, fisicos, vegetales, animales, anomalías hereditarias, autoanticuerpos.
Producción anormal: por respuesta medular deteriorada(radiaciones toxicas)omenor estimulación (insuficiencia renal, deficiencia endocrina). Hemoglobinopatías.
c) ANEMIA MICROCITICA NORMOCRÓMICA
Valor promedio encontrado: VCM: 60-80 u3 (menor que lo normal), HCM: 27-32 pg (normal), CHCM: 31-36% (normal)
Causas posibles:
Formación atípica de hematíes por:
- Inflamaciones subagudas y crónicas
- Efecto toxico de drogas
- Tumores malignos
- Alteraciones endocrinas
d) ANEMIAMICROCITICA HIPOCRÓMICA
Valor promedio encontrado: VCM: 60-80 u3 (menor que lo normol)
HCM: 19-29 pg (menor que lo normal)
CHCM: 20-30 % (menor que lo normal)
Causas posibles:
Deficiencia de hierro por: hemorragias agudas o crónicas, ingesta o absorción insuficiente de hierro, demanda aumentada de hierro (embarazo, crecimiento, regeneración sanguínea) Causas diversas: talasemia, intoxicación plúmbica, anemias sideroblásticas hereditarias o adquiridas: asociada a drogas (isoniazida, piridoxina, cloranfenicol, alcohol) o a enfermedades crónicas o neoplásicas.
• En base a V.C.M. y R.D.W.
R.D.W. Normal:
1) V.C.M. bajo : B-talasemia heterocigota, Anemia de enfermedades crónicas
2) V.C.M. normal : Hemoglobinopatías no anémicas(AS;AC), Quimioterapia, Leucemia Mieloide Crónica, Hemorragia aguda,
Esferocitosis hereditaria, Mielotoxicidad, Aplasia, Diabetes, Enfermedad renal
3) V.C.M. elevado : Anemia aplásica, Síndrome preleucémico
R.D.W. elevado:
1) V.C.M. bajo : Anemia ferropénica severa B-talasemia Hemoglobinopatía H
2) V.C.M. normal : Deficiencia de ácido fólico o vitamina B12 en estadío temprano, Hemoglobinopatías SS;SC, Anemia sideroblastica, Mielofibrosis, Anemia por deficiencia nutricionales
3) V.C.M. elevado : Deficiencia de ácido fólico o vitamina B12, Anemia Hemolítica inmune, Leucemia linfocítica crónica, Enfermedad de aglutininas frías
HEMATIMETRÍA
Denominación: Hemograma, Estudio hematológico de rutina.
En un estudio rutinario de hematimetría se van a cuantificar y evaluar diferentes grupos celulares, las glóbulos rojos (hematíes), los glóbulos blancos (leucocitos), las plaquetas, el contenido de hemoglobina, y otros parámetros relacionados con su cantidad, forma y contenido.
Valores que se estudian
|Parámetro |ValoresNormales |
|Número de hematíes |4 - 5,5 millones/ml |
|Hemoglobina |12 - 16 g/dl |
|Hematocrito |37-52 % |
|VCM |80 - 99 fl |
|HCM |27-32 pg |
|CMHC |32-36 g/dl |
|Plaquetas |135-450 miles/ml |
|VPM |9,6 fl |
|Número de Leucocitos |4,5-11 miles/ml |
|Neutrófilos |42 -75 % |
|Linfocitos |20.5- 51.1 % |
|Monocitos |1.7 - 9.3 % |
|Eosinófilos |0-1 % |
|Basófilos |0-0.2 % |


sPara qué se realiza la hematimetría?
1. La cantidad de hematíes puede ofrecer datos de salud o de la presencia de una anemia, enfermedades generales, o diferentes tipos de cáncer. Como los hematíes son los encargados de transportar la hemoglobina (proteína que porta el oxígeno a los tejidos), su disminución produce cansancio y sensación de fatiga.
2. La concentración de hemoglobina nos ofrecerá datos complementarios sobre la posible alteración del número de hematíes.3. El hematócrito, es el porcentaje de la masa del eritrocito con relación al volumen sanguíneo. Con esos datos son calculados los índices hematimétricos (VCM, HCM, VMHC). La alteración de estos parámetros nos ayudarán a orientar diferentes enfermedades que causan alteraciones en estos índices (Ejemplo: diferentes tipos de anemias
4. Los glóbulos blancos (leucocitos) son los encargados de las defensas de la persona, por ello en cuadros de infección están aumentados, o en ciertas enfermedades están disminuidos. También es importante saber cuales son las poblaciones de cada tipo de leucocitos, por ello en los resultados aparecen los neutrófilos, monocitos, linfocitos, basófilos y eosinófilos. Según los resultados de cada una de estas poblaciones se puede orientar hacia una u otra enfermedad.
5. Las plaquetas son las células encargadas de parte de la coagulación por ello si su número disminuye pueden aparecer cuadros de hemorragias (sangrados) que puede deberse a diferentes problemas y enfermedades, y su número aumenta en diferentes enfermedades reumáticas o autoinmunes.
Cada uno de estos valores puede ofrecer mayor información; por ello se relacionan cada uno de ellos por separado.
Procedimiento de Obtención
1. Para realizar este análisis no se precisa estar en ayunas.
2. Se puede realizar la toma en un lugar apropiado (consulta, clínica, hospital) pero en ocasiones se realiza en el propio domicilio del paciente.
3. Para realizar la toma se precisa de localizar una vena apropiada y en general se utilizan las venas situadas en la flexura del codo. La persona encargada de tomar la muestra utilizará guantes sanitarios, una aguja (con una jeringa o tubo de extracción).
4. Le pondrá un tortor (cinta de goma-látex) en el brazo para que las venas retengan más sangre yaparezcan más visibles y accesibles.
5. Limpiará la zona del pinchazo con un antiséptico y mediante una palpación localizará la vena apropiada y accederá a ella con la aguja. Le soltarán el tortor.
6. Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizará una aspiración (mediante la jeringa o mediante la aplicación de un tubo con vacío).
7. Si se requiere varias muestras para diferentes tipos de análisis se le extraerá más o menos sangre o se aplicarán diferentes tubos de vacío.
8. Al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con una torunda de algodón o similar para favorecer la coagulación y se le indicará que flexione el brazo y mantenga la zona presionada con un esparadrapo durante unas horas.
Problemas y Posibles Riesgos
1. La obtención mediante un pinchazo de la vena puede producir cierto dolor.
2. La posible dificultad en encontrar la vena apropiada puede dar lugar a varios pinchazos.
3. Aparición de un hematoma (moratón o cardenal) en la zona de extracción, suele deberse a que la vena no se ha cerrado bien tras la presión posterior y ha seguido saliendo sangre produciendo este problema. Puede aplicarse una pomada tipo Hirudoid® o Trombocid® en la zona.
4. Inflamación de la vena (flebitis), a veces la vena se ve alterada, bien sea por una causa meramente física o por que se ha infectado. Se deberá mantener la zona relajada unos días y se puede aplicar una pomada tipo Hirudoid® o Trombocid® en la zona. Si el problema persiste o aparece fiebre deberá consultarlo con su médico.

Hemoglobina
Definición: La hemoglobina es una proteína que contiene hierro y que le otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxígeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos.
Lahemoglobina también transporta el dióxido de carbono, que es el producto de desecho del proceso de producción de energía, lo lleva a los pulmones desde donde es exhalado al aire.
El análisis de la hemoglobina se realiza normalmente en un estudio completo de hematimetría, con el recuento de glóbulos rojos o hematíes.
Valores normales de hemoglobina
|Recién nacido |13,5 a 19,5 gr/dl |
|A los 3 meses |9,5 a 12,5 gr/dl |
|Al año de edad |11 a 13 gr/dl |
|Entre los 3 y 5 años |12 a 14 gr/dl |
|De los 5 a los 15 años |11,5 a 15 gr/dl |
|Hombre adulto |13 a 16 gr/dl |
|Mujer adulta |11,5 a 14,5 gr/dl |

sQué indican los resultados anormales?
Cuando el nivel de hemoglobina en un análisis aparece debajo de los niveles normales se está describiendo una anemia que luego puede ser de diferentes orígenes
• Anemias primarias
• Cáncer
• Embarazo
• Enfermedades renales
• Enfermedades autoinmunes
• Hemorragias
• Linfomas
• Problemas de alimentación
El nivel bajo de hemoglobina suele acompañarse de un nivel de hematocrito bajo.
Si el nivel de hemoglobina aparece alto puede deberse a:
• Cardiopatías
• Deshidratación
• Enfermedades pulmonares crónicas
INDICE HEMATOCRITO
Definición: Tras una centrifugación de la sangre total sepueden apreciar dos niveles, uno con el depósito de los glóbulos rojos, principalmente, y otro nivel del plasma total. La relación porcentual entre ambos es lo que describe el hematocrito y describe el porcentaje de células transportadoras de oxígeno con respecto al volumen total de sangre.
El análisis del hematocrito se realiza normalmente en un estudio completo de hematimetría, con el recuento de glóbulos rojos o hematíes.
VALORES NORMALES DE HEMATOCRITO
|Recién nacido |44 a 56 % |
|A los 3 meses |32 a 44 % |
|Al año de edad |36 a 41 % |
|Entre los 3 y 5 años |36 a 43 % |
|De los 5 a los 15 años |37 a 45 % |
|Hombre adulto |40 a 54 % |
|Mujer adulta |37 a 47 % |

sQUÉ INDICAN LOS RESULTADOS ANORMALES?
Un índice bajo de Hematocrito puede deberse a
• Anemia
• Fallos en la médula ósea (Radiaciones, toxinas, fibrosis, tumores, etc.)
• Embarazo
• Hemorragias
• Hipertirodismo
• Hemolisis (destrucción de glóbulos rojos) por una transfusión
• Leucemia
•Problemas de alimentación
• Artritis reumatoide
Un índice alto de Hematocrito puede deberse a:
• Cardiopatías
• Deshidratación
• Eclampsia (en el embarazo)
• Enfermedades pulmonares crónicas
• Exceso de formación de hematíes (eritrocitosis)
• Policitemia vera
• Choque (shock)
• Estancias en lugares de mucha altitud


Velocidad de Sedimentación Globular Media (VSG)
Denominación: Medición de la velocidad, VSG, Velocidad de sedimentación eritrocitaria.
Definición: La velocidad de sedimentación globular es la precipitación de los eritrocitos (glóbulos rojos) en un tiempo determinado (1-2 horas), que se relaciona directamente con la tendencia de los glóbulos rojos hacia la formación de acúmulos (pilas de monedas) así como a la concentración plasmática de proteínas (globulinas y fibrinógeno). La capacidad y la velocidad de formar estos acúmulos depende de la atracción de la superficie de los glóbulos rojos. El análisis de la VSG se realiza normalmente en un estudio completo de hematimetría.
sCuándo se eleva la VSG?
Si las proteínas del grupo de las globulinas está elevado con respecto a la albúmina la velocidad se eleva. También una alta proporción de fibrinógeno puede provocar esta elevación.
sPara qué se mide la VSG?
Los principales usos de la medición de la VSG son
1. Para detectar procesos inflamatorios o infecciosos. Como discriminador o reactante de presencia de enfermedad.
2. Como control de la evolución de ciertas enfermedades crónicas ó infecciosas.
3. Para detectar procesos crónicos inflamatorios ocultos o tumores.
El valor de la técnica no es muy sensible y además poco específica, por sí sola tiene poco valor y se debe asociar a otros estudios para poder orientar un diagnóstico.
En los primeros meses de embarazopuede aparecer elevada sin más repercusiones.

Valores normales
En la sangre normal la velocidad de eritrosedimentación es prácticamente nula, inclusive si el colesterol o otros lípidos están muy elevados puede disminuir la capacidad de formar acúmulos y disminuir más la VSG.
|Recién nacidos |hasta 2 |
|Lactantes |hasta 10 |
|Escolares |hasta 11 |
|Hombres jóvenes |hasta 10 |
|Hombres adultos |hasta 12 |
|Hombres mayores |hasta 14 |
|Mujeres jóvenes |hasta 10 |
|Mujeres adultas |hasta 19 |
|Mujeres mayores |hasta 20 |


Utilidad más discriminatoria: Si su valor es mayor de 100 mm/hora se debe de pensar que existe un problema de cáncer, colagenosis, enfermedades reumáticas, y otras enfermedades infecciosas crónicas.
Resultados anormales
La velocidad de sedimentación VSG se eleva en:
• Anemia intensa
• Artritis reumatoide
• Enfermedades renales
• Enfermedades autoinmunes (Lupus eritematoso)
• Enfermedades tiroideas
• Embarazo
• Fiebre reumática
• Infecciones agudas
• Macroglobulinemia
• Mieloma múltiple
• Polimialgia reumática
• Sífilis
• Tuberculosis
• Vasculitis
La VSG puede aparecer disminuida en:
• Descenso de proteínas en el plasma(por problemas hepáticos ó renales)
• Disminución del fibrinógeno
• Fallos cardiacos
• Policitemia


ÍNDICES HEMATIMÉTRICOS
Definición: son los parámetros que relacionan el índice hamatocrito, la hemoglobina y el número de hematíes o glóbulos rojos.
CUALES SON
• El VCM (volumen corpuscular medio) es una forma de expresar el tamaño de los eritrocitos .El valor normal es de 80-100 fl (femtolitros por hematíe).
• La HCM (hemoglobina corpuscular media) corresponde al contenido de la hemoglobina en cada eritrocito (Hemoglobina/número de hematíes). Su valor normal es de 26 a 32 picogramos.
• La CHCM es la concentración de hemoglobina comparado con el hematocrito . En los adultos sus valores normales son de 32 a 36 %.
VALORES NORMALES DE HEMATOCRITO
El tamaño de los glóbulos rojos (VCM) nos puede definir si una anemia es microcítica cuando el VCM es menor a lo normal, normocítica si es normal y macrocítica si es superior a lo normal.
Si el valor de la Hemoglobina corpuscular media (HCM) ES normal la anemia será normocrómica, si es bajo será una anemia hipocrómica ó hipercrómica si está elevado su valor.
POSIBLES CAUSAS DE LA ALTERACIÓN DE LOS PARÁMETRIS HEMATIMÉTRICOS
La macrocitosis puede deberse a defectos de ácido fólico, de vitamina B12, enfermedades hepáticas, alcoholismo, etc.
La microcitosis puede deberse a anemias por falta de hierro y por talasemias.
La hipocromia suele coincidir con la microcitosis en la falta de hierro y las talasemias.
La hipercromia suelen aparecer con la mcrocitosis se debe a defectos de ácido fólico, de vitamina B12, enfermedades hepáticas, alcoholismo, etc.
OTRAS ALTERACIONES DE LA FORMA DE LOS HEMATÍES
El aspecto de los glóbulos rojos vistos al microscopio nos puede ofrecer diversas variables que orientan a diferentesenfermedades.
• La esquistocitosis, aparece cuando los hematíes son de diferentes formas (bastones, media luna, en forma de casco, con espinas, etc.). Se suele deber a enfermedades que atacan los hematíes como la anemia hemolítica que aparece en enfermedades autoinmunes.
• La poiquilocitosis es cuando la forma de los hematíes es de lágrima o de pera, aparece en diversas anemias.
• La eliptocitosis son hematíes elípticos que se debe a anemias o a una enfermedad concreta que es la Eliptocitosis congénita.
• La drepanocitosis, la forma de los eritrocitos es de hoz, suele deberse a enfermedades congénitas
• La esferocitosis son glóbulos rojos que alteraron su forma bicóncava por la de una esfera. Es una enfermedad hereditaria que produce la alteración de la forma del eritrocito por el déficit de ciertas sustancias necesarias.
• La presencia de eritroblastos es que aparecen los hematíes con núcleo, y es por la aparición de formas jóvenes recién salidas de la médula ósea. Se debe a anemias, hemorragias, o hemólisis (rotura de hematíes) por diversas causas.
• La Leptocitos son células delgadas que cuentan con una membrana celular grande observadas en enfermedades crónicas debilitantes que producen anemia.
• La Estomatocitos son eritrocitos con una forma oval hacia el centro que se observa en la estomatocitosis hereditaria del Alaska malamut y en enfermedades hepáticas.
• Los cuerpos de Howell-Jolly, son manchas nucleares observados frecuentemente como consecuencia de un estado anémico en procesos regenerativos, no obstante si son numerosos pueden indicar problemas en el bazo.
• Los cuerpos de Heinz son estructuras localizadas en la membrana eritrocítica producto de la desnaturalización de la hemoglobina causada por la acción oxidante de ciertasdrogas o químicos.
Leucocitos. Glóbulos blancos
Denominación
• Glóbulos blancos
• Medición de leucocitos,
• Cuenta de leucocitos.
Definición
Los leucocitos o glóbulos blancos son células que están principalmente en la sangre y circulan por ella con la función de combatir las infecciones o cuerpos extraños; pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales del propio cuerpo. Es una parte de las defensas inmunitarias del cuerpo humano.
Se llaman glóbulos blancos, ya que éste color es el de su aspecto al microscopio.
Hay diferentes grupos de glóbulos blancos: los llamados polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos y los basófilos) y los mononucleares (los linfocitos y los monocitos).
El origen de todas las formas de leucocitos es a partir de células madres de la médula ósea.
Para qué se realiza su estudio
La modificación de la cantidad de leucocitos puede orientar al diagnóstico de enfermedades infecciosas, inflamatorias, cáncer y leucemias, y otros procesos. Por ello el recuento es muy orientativo en diferentes enfermedades. Además el porcentaje de cada grupo de leucocitos nos ofrecerá una mayor información para precisar un diagnóstico.
Cuando en la medición de leucocitos se ven células jóvenes aparecen los neutrófilos en forma de núcleo en forma de bastón (cayados), y un aumento del porcentaje de los glóbulos blancos polimorfonucleares, esto se denomina como desviación 'a la izquierda'. Este término sugiere infecciones bacterianas agudas.
El estudio de los leucocitos se realiza habitualmente en un estudio de hematimetría y recuento leucocitario completo.
Valores normales de leucocitos
|Recién nacido |10 a 26 mil/mm3 |
|A los 3 meses |6 a 18 mil/mm3|
|Al año de edad |8 a 16 mil/mm3 |
|Entre los 3 y 5 años |10 a 14 mil/mm3 |
|De los 5 a los 15 años |5 a 12 mil/mm3 |
|Hombre adulto |4,5 a 10 mil/mm3 |
|Mujer adulta |4,5 a 10 mil/mm3 |


sQué indican los resultados anormales?
Un número disminuido de leucocitos (leucopenia) pueden aparecer en ciertas enfermedades
• Fallo de la médula ósea (por tumores, fibrosis, intoxicación, etc.)
• Enfermedades autoinmunes (Lupus, etc.)
• Enfermedades del hígado o riñón
• Exposición a radiaciones
• Presencia de sustancias citotóxicas
Un número aumentado de leucocitos (leucocitosis) puede deberse a:
• Daño de tejidos en quemaduras
• Enfermedades infecciosas
• Enfermedades inflamatorias (por autoinmunidad-reumáticas ó por alergia)
• Estrés
• Leucemia
Alteraciones de la medición por la actuación de medicamentos
Pueden aumentar el número de leucocitos:
• Alopurinol
• Epinefrina ó adrenalina
• Cortisona
• Cloroformo
• Heparina
• Quinina
• Triamterene
Pueden disminuir el número de leucocitos:
• Antibióticos
• Anticonvulsivantes
• Antihistamínicos
• Antitiroideos
• Arsenicales
• Barbitúricos
• Diuréticos
• Quimioterápicos
• Sulfonamidas


FÓRMULA LEUCOCITARIA
Denominación: Poblaciones de leucocitos, Recuento de leucocitos.
Definición: La fórmula de leucocitos o leucocitaria mide el porcentaje presente de cada tipo de leucocitos en el total de glóbulos blancos. Al ser un porcentaje al aumentarun grupo de leucocitos disminuye otro, aunque en ocasiones solo existe un aumento o disminución de un tipo concreto y por ello solo el porcentaje ofrece una valoración orientativa pero se debe contar el número total de cada grupo para saber cuál es la variable a tomar en cuenta y estudiar.
GRUPOS DE LEUCOCITOS
Hay diferentes grupos de glóbulos blancos, los llamados polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos y basófilos) y los mononucleares (linfocitos y monocitos).
Los leucocitos neutrófilos son los más numerosos y porcentualmente los más significativos que se encuentran. Su función es la fagocitosis que se entiende como si fuera una absorción y digestión de sustancias extrañas (bacterias, cuerpos extraños, tejidos, etc.). Las formas inmaduras que aparecen cuando hay un estímulo intenso medular para su producción se llaman cayados (por la forma del núcleo); suele indicar la existencia de actividad intensa de las defensas contra infecciones por bacterias.
Los leucocitos eosinófilos se llaman así por el color rojo en el que aparecen al microscopio por una tinción con eosina. Suelen estar elevados en ciertas enfermedades causadas por alergia o por infecciones parasitarias.
Los basófilos suelen tener un comportamiento similar.
Los leucocitos mononucleados son los linfocitos y los monocitos. Tienen un núcleo celular único y pequeño. Sus funciones son las combatir infecciones virales y bacterianas crónicas.
PARA QUÉ SE REALIZA SU ESTUDIO
La modificación del porcentaje de leucocitos puede orientar al diagnóstico de enfermedades infecciosas, inflamatorias, y otros procesos.
Cuando en la medición de leucocitos se ven células jóvenes aparecen los neutrófilos en forma de núcleo en forma de bastón (cayados), y un aumento del porcentaje de los glóbulos blancos polimorfonucleares. esto sedenomina como 'desviación a la izquierda'. Este término sugiere infecciones bacterianas agudas.
La 'desviación a la derecha' se dice cuando el porcentaje de linfocitos y monocitos se encuantra aumentado con respecto al de los polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos y basófilos), se asocia en general a enfermedades víricas.
La eosinofília, que es el aumento del porcentaje o del número total de eosinófilos, sugiere un cuadro alérgico o una infección parasitaria.
El recuento de leucocitos se realiza habitualmente en un estudio de hematimetría y recuento leucocitario completo.
Valores normales
|Grupo de leucocitos |Valor % |Valor absoluto |
|Neutrófilos |55 a 70 % |2.500 a 8.000 mil/mm3 |
|Linfocitos |20 a 40 % |1.000 a 4.000 mil/mm3 |
|Monocitos |2 a 8 % |100 a 700 mil/mm3 |
|Eosinófilos |1 a 4 % |50 a 500 mil/mm3 |
|Basófilos |0 a 1 % |25 a 100 mil/mm3 |

PRACTICA
DETERMINACIÓN DE LA VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR, EL HEMATOCRITO Y RECUENTO FORMULA DIFERENCIAL

1. PRUEBAS A EFECTUAR DURANTE LA PRÁCTICA.
a. Toma de la muestra de sangre venosa
b. Determinación de la velocidad de sedimentación globular (método según 'Wintrobe
c. Medición del hematocrito (micro método con tubo capilar)
d. Determinación de la formula blanca diferencial

2. PROCEDIMIENTOS
2.1. TOMA DE LA MUESTRA DE SANGRE VENOSA
2.1.1. MATERIALES
- Jeringa desechable de 5 mil, con aguja- Torniquete
- Algodón y alcohol antiséptico
- Tubo de ensayo(conteniendo anticoagulante EDTA, cantidad suficiente para 5 ml de sangre)


2.1.2 2 REACTIVOS
- anticoagulante EDTA: 0.1 ml de una solución al 10%(p/v) para cada 5 ml de sangre.

2.1.3. PROCEDIMIENTO
1-Aplique el torniquete sobre el brazo de la persona voluntaria a quien se le extraerá la muestra de sangre, apretándolo lo suficiente para disminuir el retomo venoso pero no tanto como para impedir la circulación arterial. Haga que el voluntario apriete y afloje el puño varias veces.
2-Escoja una vena adecuada en el pliegue del codo y desinfecte cuidadosamente la piel sobre la vena, cuidando que el bisel de la guja quede hacia arriba.
3-Deje secar el alcohol y puncione la piel y la vena, cuidando que el bisel de la aguja quede hacia arriba.
4-Succione lentamente la sangre a la jeringa y simultáneamente afloje el torniquete o si usa Vacutainer este succiona solo por el vacío que hay en el tubo.
5-Retire la aguja de la vena y aplique una torunda de algodón sobre el sitio de la punción, ejerciendo presión moderada.
6-Sin tardanza retire la aguja de la jeringa y transfiera cuidadosamente la sangre al tubo de ensayo que contiene el anticoagulante EDTA y mezcle por inversión varias veces. Esta sangre anticoagulada es la que se utilizará en todas las determinaciones de la práctica.
7-Descarte la aguja usada en un recipiente de bioseguridad (guardián) y la jeringa y las torundas de algodón contaminadas con sangre en el recipiente color rojo destinado a material no corto punzante de riesgo biológico.

2.2. DETERMÍNACIÓN DE LA VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR (v.s.g.

2.2.1. MUESTRA
-Sangre venosa anticoagulada con EDTA (aproximadamente 1,2 ml)

2.2.2 MATERIALES


-Tubo de eritrosedimentación según Wintrobe:estos son tubos de vidrio, de 11,5 cm de largo y 3 mm de diámetro interno, con una escala en milímetros a lo largo del tubo, con el valor de los centímetros expresado en números tanto en el sentido ascendente como descendente. Además de usarse para la v.s.g. estos tubos pueden utilizarse para la determinación del hematocrito mediante la técnica macro (Wintrobe)
-Cánula de Wintrobe: esta es una aguja metálica roma, de 15 cm de largo y que se utiliza para llenar con sangre los tubos de eritrosedimentación con la ayuda de una jeringa
-Jeringa de vidrio
-Soporte para tubos de Wintrobe
-Reloj

2.2.3. REACTIVOS
Ninguno

2.2.4. PROCEDIMIENTO
1-Coloque la cánula de Wintrobe en la jeringa de vidrio.
2-Succione aproximadamente 1.5 ml de sangre anticoagulada dentro de la jeringa; manteniendo esta en posición vertical para que las burbujas suban al cuerpo de jeringa.
3-Utilizando la jeringa con la cánula llene con sangre el tubo de Wintrobe. Para ello introduzca la cánula hasta el fondo del tubo y expulse muy lentamente la sangre de jeringa mientras que simultáneamente retira la cánula hacia la boca del tubo, cuidando que no queden burbujas de aire atrapadas dentro de la columna de sangre. La cantidad de sangre finalmente colocada en el tubo debe ser la suficiente para llenarlo hasta marca '0' superior.
4-Coloque el tubo en el soporte especial para tubos de Wintrobe cuidando que quede ( estricta posición vertical).
5-Registre el tiempo y efectúe lecturas de la sedimentación cada 15 minutos hasta completar 60 minutos, registrando estos valores en la tabla de datos del informe c práctica.
6- El valor de la sedimentación globular es el número de milímetros de plasma libre de eritrocitos que se encuentra por encima de la columna de células sedimentadas
7- Diligencie la tabla de valores yrealice una gráfica colocando en las abscisas y en ordenadas el valor de la sedimentación


Nota: entre muestra y muestra de sangre es necesario lavar la jeringa de vidrio cánula de Wintrobe. primero con agua corriente y luego con solución salina fisiológico (solución de NaCl 0.9% p/v).

2.3. MEDICION DEL HEMATOCRITO
2.3.1. MUESTRA
-Sangre venosa anticoagulada con EDTA (aprox. 60 (l

2.3.2. MATERIALES
-Tubos capilares de vidrio
- Plastilina para sellar los tubos
- Regla milimétrica

2.3.3. REACTIVOS
Ninguno

2.3.4. EQUIPOS
-Micro centrífuga para hematocrito: esta es una centrífuga de velocidad fija (14.000 rpm) que permite centrifugar los tubos capilares una vez llenados con sangre anticoagulada y sellados con plastilina

2.3.5. PROCEDIMIENTO
1-Para cada muestra llene por capilaridad, hasta aproximadamente 3/4 de su longitud, un tubo capilar con sangre anticoagulada
2- Selle uno de los extremos del tubo con plastilina
3- Coloque los tubos en la micro centrífuga
4- Centrifugue los tubos por 5minutos y espere a que la centrífuga se detenga automáticamente al final del tiempo seleccionado
5-Determine el valor del hematocrito de la siguiente manera:
Altura total de la muestra dentro del tubo (mm) = 100%
Altura total de la columna de células rojas (mm) = porcentaje de hematocrito
6-Transfiera el valor obtenido a la tabla de resultados del informe.
7-Descarte los tubos capilares usados en el recipiente de bioseguridad (guardián
Nota: este método puede también usarse con sangre capilar obtenida por punción lanceta. Para ello deben utilizarse tubos capilares previamente heparinizados



































FISIOLOGÍA DE LA SANGRE - SESIÓN DE LABORATORIO HOJA DE INFORME
Grupo _Mesa:__Fecha:_______________
Alumnos:Muestra:___________________

1. RESULTADOS DE ERITOSEDIMENTACION
|Tiempo (minutos) |15 |30 |45 |60 |
|Sedimentación (mm) |

2. GRÁFICA DE ERITROSEDIMENTACION







3. RESULTADOS DE HEMATOCRITO:
|Altura de la muestra (mm)
|Altura de la columna de células rojas (mm)
|Valor del hematocrito (%)

4. PREGUNTAS PARA RESPONDER
a. Luego de realizada la práctica, que entiende Usted por v.s.g.?
b. Y por hematocrito?
c. A qué variaciones fisiológicas está sujeta la v.s.g.?
d. Y a cuáles el hematocrito?
e. Cuáles de los parámetros determinados le servirían a Usted para diagnosticar anemia y por qué?


















DETERMINACIÓN DE LA FORMULA BLANCA DIFERENCIAL EN LA SANGRE

2.3.1. MUESTRA
-Sangre venosa anticoagulada con EDTA (1 gota

2.3.2. MATERIALES
-Dos láminas portaobjetos
-Pipeta según Pasteur
-Goteros para colorante

2.3.3. REACTTIVOS

-Colorante de Wright: que es un colorante complejo formado por una mezcla de azul de metileno y eosina junto con bicarbonato; esta mezcla es conocida como “polvo Wright”. El colorante, está listo para su uso, se prepara de la siguiente manera:
Polvo de Wrigtj 0.1 g
Glicerol 3 ml
Metanol absoluto 60 ml

-Buffer según Giordano: este es un buffer fosfato usado para lograr el contraste coloración Wrigt. Contiene:
Fosfato potásico monobásico anhidro 6.63 g
Fosfato sódico di básico anhidro 2.56 g
Agua destilada q.s.p. 1000 ml
Ajustado a pH 6.5.

2.3.4. EQUIPOS
-Microscopio de luz


2.3.5. PROCEDIMIENTO
2.3.5.1. PRIMERA ETAPA: Elaboración y tinción del extendido de sangre1-Mezcle por inversión el tubo de ensayo que contiene la sangre anticoagulada.
2-Usando una pipeta según Pasteur. Coloque una gota de sangre anticoagulada, de i mm de diámetro, sobre un portaobjetos, a 1 o 2 cm de uno de los extremos.
3-Coloque la lámina sobre la mesa.
4-Para realizar el extendido se usa otra lámina portaobjetos (extendedor), de la siguiente manera: coloque el extremo angosto del extendedor sobre la superficie de la lámina con la gota de sangre, formando un ángulo diedro de unos 30° quedando la gota hacia la concavidad del ángulo y a unos 5 mm del borde del extendedor. Luego desplace lentamente el extendedor hasta tocar con su borde la gota de (inmediatamente la gota de sangre se dispersará hasta abarcar toda la longitud extremo del extendedor). A continuación y manteniendo el ángulo de 30° se mueve extendedor, con un movimiento suave y uniforme, hacia el otro extremo del portaobjetos; con esto, la sangre queda dispersa formando un extendido sobre el portaobjetos.
5- Deje secar el extendido al aire
6- A continuación proceda a la tinción del extendido de la siguiente manera
a. coloque la lámina con el extendido en la gradilla para coloraciones
b. usando un gotero cubra completamente el extendido con colorante según Wright
c. Deje actuar el colorante durante 3 minutos
d) A continuación y sin retirar el colorante, adicione una cantidad similar de fosfato según Giordano sobre el colorante, cuidando de no causar la salida de este del portaobjetos.
e) Deje actuar la mezcla colorante-buffer por 4 minutos.
f) Lave la lámina con agua corriente.
g ) Deje secar completamente la lámina al aire.

2.3.5.2. SEGUNDA ETAPA: Conteo de las poblaciones leucocitarias
El conteo de las poblaciones leucocitarias en el extendido previamente teñido consiste en la enumeraciónde los diferentes tipos de células blancas presentes. Para ello
1-Coloque la lámina en posición sobre la platina del microscopio.
2-Examine al microscopio el frotis, usando primero el objetivo 10X; observe la distribución general de las células y la proporción de leucocitos con respecto a los eritrocitos.
3-Usando el objetivo 100X de inmersión en aceite, examine cuidadosamente los diversos tipos de leucocitos en el frotis; una vez se haya familiarizado con características específicas de cada tipo, cuente 100 leucocitos, apuntando en la hoja de informe su clasificación en cada una de las clases de leucocitos.
4-La fórmula blanca diferencial o recuento diferencial queda constituido por la proporción, expresada en porcentaje de cada una de las clases de leucocitos presentes la muestra.





























No. 2 HOJA DE INFORME
Grupo:__ Mesa:_ Fecha:______
Alumnos:
1. RESULTADOS DEL RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS:
|Tipo de leucocito |Número |
|Neutrófilo segmentado
|Neutro tilo en banda
|Eosinófilo
|Basófilo
|Linfocito
|Monocito
|TOTAL |100 |


2. PREGUNTAS PARA RESPONDER
a) Luego de realizada la práctica, qué entiende Usted por recuento leucocitario?




c) Qué entiende por 'fórmula blanca diferencial'?
d) A qué variaciones fisiológicas esta sujeta la fórmula blanca diferencial?
e) Qué significan los siguientes términos?
- Leucocitosis
- Leucopenia:
- Neutrofilia:
- Neutropenia:
- Eosinofilia:
- Linfocitosis:
- Linfopenia__