Preparación de
medios de
cultivo
P3


 Uno

de los sistemas más
importantes
para
la
identificación
de
microorganismos es observar su
crecimiento
en
sustancias
alimenticias
artificiales
preparadas en el laboratorio.

 El

material alimenticio en el que
crecen los microorganismos es el


Medio de Cultivo

Y

el crecimiento de los
microorganismos es el


Cultivo


Tipos de medios de cultivo
Medios sólidos y líquidos
Los medios sólidos se preparan como los medios líquidos y se les añade o contienen agar (1.5%) como agente
gelificante.
El agar es un polímero sulfatado compuesto por D-galactosa, 3,6-anhidro-L-galactosa y ácido glucurónico.

Se funde a 80-90sC y se puede enfriar hasta una temperatura de 40 a 42 sC sin endurecerse.
La mayoría de los microorganismos no pueden degradarlo.
El agar se funde durante el proceso de esterilización, el medio fundidoy enfriado a 45°C se vierte sobre placas Petri y se
deja solidificar antes de su uso.
Los medios sólidos inmovilizan a las células, permitiéndolas crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias.

Medios generales
Los medios generales mantienen el crecimiento de muchos microorganismos. Ej., el caldo y agar nutritivo

Medios enriquecidos
Medios generales a los que se añaden nutrientes especiales para mantener el crecimiento de microorganismosheterótrofos exigentes. Ej., el agar sangre

Medios selectivos
Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares. Ej.,agar Levine (eosina-azul de metileno) y Agar
MacConkey se emplean para detectar enterobacterias. Contienen colorantes y sales biliares que inhiben el
crecimiento de las bacterias Gram positivas.
Otros medios selectivos contienen nutrientes que pueden utilizar algunas bacterias de forma específica. Ej., el agar
celulosa se usa para aislar bacterias que digieren la celulosa.

Medios diferenciales
Medios que diferencian entre grupos distintos de bacterias e incluso permiten una identificación tentativa de los
microorganismos según sus características biológicas.
El agar MacConkey es tanto selectivo como diferencial. Como contiene lactosa y colorante rojo neutro, las colonias
fermentadoras de lactosa (Escherichia coli) aparecen de color rosa o rojo y se distinguen fácilmente de las colonias no
fermentadoras.


El medio de cultivo químicamente definido se prepara añadiendo cantidades precisas
de compuestos orgánicos e inorgánicos puros a un volumen conocido de agua destilada.
Se conoce su composición exacta.

Medio definido para Escherichia coli

K2HPO4
KH2PO4
(NH4)2SO4
MgSO4
CaCl2
Glucosa
Elementos traza
(Fe, Co, Mn, Zn,
Cu, Ni, Mo)
Agua destilada
pH7

7g
2g
1g
0,1 g
0,02 g
4-10 g
2-10 g1000 ml


Para elaborar el medio complejo se utilizan hidrolizados de proteínas y otras
sustancias muy nutritivas pero no definidas químicamente que se pesan y se añaden a un
volumen conocido de agua.
No se conoce la composición exacta del medio complejo.

Medio complejo
para Escherichia coli
y Leuconostoc mesenteroides

Glucosa
15 g
Extracto de levadura 5 g
Peptona
5g
KH2PO4
2g
Agua destilada
1000 ml
pH7


Preparación de medios de cultivo
Pesar componentes sólidos:

encender

colocar recipiente para
pesar

verificar la lectura

tarar

colocar el componente
a pesar


Disolver con agua destilada: hidratar

Medir la cantidad
de disolvente
necesario: H2O
destilada

colocar mitad del
agua y agregar los
componentes sólidos

disolver

agregar el resto del agua


Regular pH: pHmetro

soluciones reguladoras

encendido y lavado

protección del electrodo

lectura

lavado del electrodo


Preparación de medio sólido

Agua destilada
œ volúmen

Fundir al calor

Agregar medio pesado

Completar el volumen de
agua destilada

Medio agarizado


Fraccionar y acondicionar para esterilizar

Fraccionamiento de
medio líquido

Fraccionamiento de
medio sólido
(en caliente)

Acondicionado
para esterilizar


Esterilizar en autoclave


ASEPCIA:
use mechero

Medios en “Pico de flauta”