OBTENCION DEL ATP DEL MUSCULO DE CONEJO

RESULTADOS Y OBSERVACIONES:

a).- ANESTECIA DEL CONEJO
Se le inyecto al conejo 1 ml. De sulfato de magnesio penta hidratado al 5% por kilo de peso del conejo por lo tanto el conejo utilizado en esta practica peso 5 kilos y en total de anestesiase utilizo 5 ml. Inyectados al conejo por vía intraperitoneal. A los 10 min. Se le inyecto más anestesia al conejo para que su muerte fuera más rápida.

b).- OBTENSION DEL MUSCULO
Se decapito el conejo cortándole la yugular y se dejo desangrar para después proseguir con despellejarlo. Enseguida se extrajo el músculo y se puso en hielo obteniendo 450 grms de puro músculo y se puso en hielo. después los trozos de músculo se cortaron en pequeños fragmentos y se regresaron al hielo correspondiente.

c).- EXTRACCION DEL ATP
Se trituraron los pequeños fragmentos del músculo del conejo en la licuadora con ac. Tricloroacetico al 10% hasta obtener un buen triturado. Después el extracto se filtra y el residuo se trato de nuevo con ac. Tricloroacetico y se volvió a triturar en la licuadora prosiguiendo después a otro filtrado después este mismo filtrado se filtra a través de Buscher con vacío hasta obtener un filtrado claro. Después se añadieron 5 gotas de bromo timol y se titulo hasta obtener un pH 6.8 (color verde) añadiendo NaOH al 40%.

d).- PRIMERA PRECIPITACIÓN COMO SAL DE BARIO
Se añadió acetato de bario 2 M alfiltrado (3 ml. De acetato de bario por cada 100 gramos de músculo). Después se agito y se dejo reposar la mezcla durante toda una semana.


B).- SEGUNDA PARTE

Se decanto el líquido filtrado y se centrifugo por minutos descartando después el sobrenadante. El precipitado se disolvió en HNO3 0.2 n (40 ml. DE HNO3 por cada 100 gramos de músculo original). Después se añadió el reactivo de Lohmann (1ml por cada 100 gramos de músculo original), para poder precipitar el ATP en forma de sal de mercurio. Después se enfrió en baño de hielo por 15 min. Y luego se prosiguió a decantar y centrifugar para aislar el precipitado, descartando después el sobrenadante.
El precipitado se suspendió en 30 ml. De agua destilada y se saturo la reacción con H2S para descartar la sal de mercurio del ATP., se agita la solución se centrifuga y aquí si se conserva el sobrenadante y se descarta el precipitado o bien repitiendo el procedimiento con el precipitado para obtener mas sobrenadante.
La solución se neutraliza a pH de 6.8, se le añade acetato de bario 2M hasta que no se forme l precipitado y se guarda la solución durante toda una semana.

C).- TERCERA PARTE

La solución se decanto y centrifugo por ultima vez para obtener un precipitado el cual se disolvió en 3 ml. De HNO3 al .2 N y se le añadió unas gotas de ácido sulfúrico concentrado para poder precipitar las trazas de HGS junto con algo de sulfato de bario, prosiguen a neutralizar la solución. Después seañadió 3 ml. de acetato de bario 2 M y se dejo enfriar en un baño de agua de hielo durante 30 min. Y después se centrífugo para obtener un precipitado el cual se lavo con 10 ml. de acetato de bario al 1% y se centrifugo y filtro, lavando después el precipitado obtenido con 10 ml. de etanol al 50 %, luego con 10 ml. de etanol al 75 %, luego con 10 ml de etanol al 95 % y finalmente con 10 ml de éter etílico centrifugándolo después de cada lavado.


D).- CUARTA PARTE

REACCION DE BIAL COMO PRUEBA DE LA EXISTENCIA DEL ATP.

Parte del precipitado se disolvió en 2 ml. de HNO3 .2 N, añadiendo también 5 ml del reactivo de bial y llevando la solución a un baño María hasta que se obtuvo un color verde que viene siendo la prueba positiva de bial.

También otra parte del precipitado se disolvió con soln patron de ribosa o de Xilosa al 0.1 M para Compara el color.


CONCLUSION

Al levar acabo esta practica o este experimento seguimos un método modificado del método descrito por Louis Bergen pero el método original fue propuesto por Lohmann, S. Búster Y Kerr. Donde el ATP extraído del músculo de un conejo fue tratado con diferentes sustancias y sometido a varios procedimientos, para al final obtener un precipitado y hacerle la prueba del ATP que en nuestro caso salio positiva con el método o la reacción de Bial, que dio positiva por la presencia de la ribosa.
Por lo tanto se a obtenido un conocimiento en el laboratorio que refuerza lo ya dichoteóricamente.


CUESTIONARIO

1.- sCuáles fueron las investigaciones con las que se determino la importancia de los fosfatos orgánicos en el metabolismo?
La importancia fue descrita por Harder y Young en sus estudios de fermentación que tuvieron como consecuencia el aislamiento de metabolitos. Embden, Meyer, Of., Dormas y Cori señalaron que estos metabolitos también eran intermediarios en el metabolismo de glucogeno y la glucosa en el músculo y otros tejidos. Fiske Subarrow y Engleton descubrieron la cretina fosfato en el músculo de los vertebrados y meyer Of. Y Ruranyi encontraron que la rotura enzimático de la creatina fosfato liberaba mucha energía. Lundsgaard mostró que la energía producida en la contracción muscular, era aproximadamente equivalente a la energía liberada en la rotura de la creatina fosfato.

2.- scuando y como se descubrió el ATP?
En 1931 Lohmann aisló por primera vez el ATP Apartir del músculo.




3.- sQué es más importante en el músculo la creatinafosfato o el ATP? Explique.
El ATP ya que es el que proporciona mayor energía para la contracción muscular y la descomposición de este precede a la ruptura de la creatina fosfato y que la rotura de esta se debe a la reacción con el ADP formado en la descomposición del ATP.

4.- sPor qué hay que anestesiar al conejo antes de sacrificarlo? sQue anestesia se usa?
Se usa Sulfato de Mg penta hidratado al 5% para dormirlo y que no sienta nada al morir.

5.- sporque que hay quehacer precipitaciones sucesivas para la obtención del ATP? sY cual es el ppal. Contaminante?
Mientras mas precipitaciones se hagan mayor será la pureza del ATP que se obtiene. El ppal. Contaminante es la sal de bario del ADP.

6.- sCómo se puede demostrar que lo obtenido es realmente ATP?
Con una reacción de Bial