COPROPARASITOSCÓPICOS POR CONCENTRACIÓN
Métodos de sedimentación
a) Método de Ritchie
b) Sedimento en copas

Objetivo
Describir la utilidad, limitaciones, el procedimiento a seguir en los métodos coproparasitoscópicos
de sedimentación y su aplicación para el diagnostico de parasitosis.
Actividades
1. Revisión bibliografica individual y por equipo
2. Discusión dirigida
3. Realización de la practica
4. Comentarios y conclusiones
5. Elaboración del reporte.
Guía de estudio
5. De manera breve describa los principales antecedentes, utilidad y limitaciones de cada uno
de los métodos.
6. Enliste usted los reactivos y materiales a utilizar por cada método

7. Mediante esquemas y/o diagrama describa usted el procesamiento a seguir en cada método













INTRODUCCIÓN

Método de Ritchie

GENERALIDADES: En 1917 Carles y Barthelemy describieron el primer método de concentración por sedimentación utilizando solución salina, éter y formaldehído, años mas tarde, en 1948 Ritchie describió un método semejante, el cual hasta la fecha se sigue utilizando. En evaluaciones comparativas con este método, se ha demostrado su utilidad para el diagnóstico de parasitosis intestinales leves o moderadas.
     El empleo de éter y formaldehído, permite con el primero, liberar las formas parasitarias de las grasas, por disolución de las mismas y con el formol se fijan y conservan. La concentración se hace por centrifugaciones sucesivas. Unas ventajas que tiene este método es concentrar yno deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.
 
MATERIAL Y EQUIPO
Microscopio
Centrífuga
Tubos de ensaye cónicos de 15 ml
Gasa cortada en cuadros de 15 cm por lado
Embudos de polietileno
Vasos de precipitado de 50 ml
Aplicadores de madera
Pipetas Pasteur con bulbo
Portaobjetos de 26 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Solución salina  isotónica
Solución de formaldehído al 10%
Éter etílico comercial
 
METODO
1. Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia fecal en el vaso de precipitado, se añaden 10 ml de solución salina y se homogeniza.
2. Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.
3. Se centrífuga la suspensión durante 1 min a 2000 rpm.
4. Se decanta el sobrenadante  y se resuspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo las veces necesarias hasta que el sobrenadante sea claro.
5. Al último sedimento se agregan 10 ml de solución de formaldehído al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 min
6. Se añaden después 5 ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos.
7. Se centrífuga durante 2 minutos a 1500 rpm.
8. Después de centrifugar se observan 4 capas:
a) éter en la superficial,
b) un tapón de restosfecales,
c) formaldehído,
d) sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.
9. Se introduce la pipeta Pasteur hasta la capa d, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.
10. Se le añade una gota de lugol y con uno de los angulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubriéndolo con el  mismo.
11. Se observa la preparación en el microscopio con objetivos de 10X y 40X.
12. Se anotan resultados de observación y hacer dibujos.


Método de Sedimentación Simple en Copas
FUNDAMENTO:Este procedimiento de decantación en copas es una técnica farmacéutica conocida desde muchos años en el cual se utiliza un procedimiento físico para la separación de mezclas.
Este método también es utilizado para el diagnostico de aquellas muestra de heces fecales sospechosas de contener huevos de Fasciola hepatica; el método ha demostrado ser bondadoso para otro tipo de huevos de helmintos e incluso para quistes de protozoario. Las ventajas que tiene, sobre otro, es que hace una concentración de volúmenes considerablemente grandes de materia fecal.
MATERIAL
REACTIVOS:
Verde de malaquita
Detergente
Agua de la llave ó Agua destilada  
SOLUCIONES
Solución de detergente al 5% ( Se pasan 5 g de detergente de cualquier marca y se disuelve en 1000 ml de agua; el detergente que no se alcance a disolver, se sedimenta y decanta el sobrenadante o se deja en el frasco donde se guarda la solución, pues no interfiere en el proceso)
Solución de  verde de malaquita al 1% ( Sedisuelve el verde de malaquita en los 100 ml de agua y se guarda la solución en frascos con tapón esmerilado).  
VIDRIERÍA
Copas crónicas
Pipeta pasteur
Portaobjetos
Cubreobjetos.
Embudo
APARATOS:
Microscopio compuesto  
OTROS:
Aplicadores de madera
Bulbos de caucho
Gasa

METODO
1. En el recipiente donde se llevo la muestra al laboratorio se homogeneiza la muestra con agua de la llave y se hace pasar a través de la gasa previamente colocada en un embudo y recibiendo la suspensión en la copa.
2. Se colocan 5 ml de colorante y se agita con un aplicador
3. Se agregan 5 ml de la solución de detergente y se agita nuevamente
4. Se completa el volumen de la copa y se deja reposar durante 15 min
5. Se decanta el sobrenadante y se agrega mas agua, mezclando con el aplicador y se deja reposar otros 15 min
6. Se decanta nuevamente el sobrenadante.
7. Con la pipeta con bulbo, se toma del sedimento la muestra que se coloca en el  portaobjetos  y se pone el cubreobjetos.
8. Se observa con el microscopio, usando objetivos de 10X y 40X, cuando sea necesario.
9. Se hacen tres preparaciones de cada sedimento para asegurar la positividad de la muestra. Cuando se tiene suficiente practica se puede utilizar la lupa del microscopio, sobre todo cundo se busca la F. hepatica.





BIBLIOGRAFÍA
Organización Panamericana de la Salud
Manual de técnicas basicas para un laboratorio de salud.
Diagnostico para el laboratorio
Tay J., y cols Parasitología Medica 9ª Ed Méndez Editores. México DF.