CENTRO DE CIENCIAS BASICAS
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
ACADEMIA DE BIOQUÍMICA

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I

PREPARACIÓN DE UN BUFFER Y SU ACCIÓN AMORTIGUADORA

* Preparar una solución amortiguador y observar su acción en material biológico.
INTRODUCCIÓN: |

La definición general de una solución amortiguadora o buffer es que son soluciones que resisten mucho los cambios de pH cuando se les añaden acidos o bases. Casi siempre estan formadas por acidos débiles y sus sales. Comparemos los cambios de pH que se dan al añadirse cantidades iguales de acido fuerte o base fuerte a agua pura con pH 7 y a una solución amortiguadora con pH 7.
Las soluciones amortiguadoras tienden a resistir cambios de pH cuando se agregan cantidades moderadas de acidos o bases fuertes.
Las soluciones amortiguadoras pueden mantener el pH en un valor relativamente constante gracias a la presencia de cantidades considerables tanto del acido como de la base conjugada. Esta condición se satisface a valores de pH cercanos al pKa del acido. Sise añade OH-, estara presente en solución una cantidad apreciable de la forma acida del amortiguador que puede reaccionar con la base agregada. Sise añade H+, también habra una cantidad apreciable de laforma basica del amortiguador que puede reaccionar con el acido añadido.

Al agregar iones de hidrogeno en forma de un acido fuerte a una solución amortiguadora, descompone la sal de la mezcla buffer y se forma un acido débil que se disocia poco a poco y por lo tanto no modifica el pH en forma significativa. Cuando se añade a la misma solución amortiguadora iones OH- en forma de una base fuerte, reacciona con el acido de la mezcla buffer y se forma agua y una sal disociada, que tampoco determina una notable variación de pH.
Para la elaboración de las sustancias amortiguadoras es necesario, a parte de la utilización de la ecuación de Henderson – Hasselbalch, efectuar muchos calculos de proporciones base conjugadas.
Para describir un sistema amortiguador se requieren dos parametros:
* El pH de la solución amortiguadora: el cual indica la región de concentración del ion hidrogeno en el cual se realiza el efecto amortiguador (alrededor de +/- una unidad de pH amortiguador).
* La capacidad amortiguadora. Es decir, la capacidad de resistir la adición de acido o base con poco cambio de pH, lo que se relaciona de manera directa con la concentración de todos los constituyentes del amortiguador.
MATERIALES Y REACTIVOS: |

MATERIAL | REACTIVOS |
4 vasos de precipitado de 100ml | Fosfato monoacido de potasio 0.15M (KH2PO4) 100ml |
2 pipetas de 10ml | Fosfato monoacido de sodio 0.15M (Na2HPO4) 100ml |


4 pipetas de5ml | NaOH 0.1M |
6 tubos de ensaye | HCl 0.1M |
1 gradilla | Albúmina de huevo al 2%, 75ml |
2 pipetas Pasteur con bulbo | Agua destilada |
1 vaso de precipitado de 250ml
1 potenciómetro

PROCEDIMIENTO: |

1.- PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN BUFFER:

2.-ACCIÓN AMORTIGUADORA DEL BUFFER PREPARADO Y UN BUFFER BIOLÓGICO:

# TUBO | SOLUCION A COLOCAR | PH INICIAL | ADICIONAR | PH FINAL |
1 | 10ml H2O destilada 4 gotas de HCl 0.1N
2 | 10ml solución buffer preparada 4 gotas HCl 0.1N
3 | 10ml albúmina de huevo 4 gotas de HCl 0.1N
4 | 10ml H2O destilada 4 gotas de NaOH 0.1N
5 | 10ml solución buffer preparada 4 gotas de NaOH 0.1N
6 | 10ml de albúmina de huevo 4 gotas de NaOH 0.1N

CUESTIONARIO: |

1) ¿por qué el agua destilada observa mayor alteración de pH?
El agua destilada presenta características de neutralidad, por lo tanto al añadirle cualquier otro compuesto interactuado con el presentara basicidad o acidez dependiendo del compuesto agregado.
2) ¿por qué considera que la albúmina de huevo debe tener propiedades amortiguadoras?
La albúmina no es de consistencia uniforme. Una parte de ella es espesa; otra es delgada y acuosa. La albúmina espesa, ademas de ser utilizada como comida, tiene una función como ligadura suspensoria y amortiguador para la yema.
3) ¿qué papel desempeñan las soluciones buffer dentro de labioquímica?
Las sustancias amortiguadoras o buffers tienen un papel importante para la regulación de pH en los medios biológicos celulares y extracelulares. Su función es reducir al mínimo los cambios en la concentración de iones hidrogeno y por lo tanto, también en la concentración de iones hidroxilo, cuando se agregan pequeñas cantidades de acidos o bases.
4) ¿qué sucede cuando en un sistema amortiguador la concentración molar de la sal y el acido que integran la solución con iguales?
La condición de que un amortiguador contenga cantidades apreciables tanto de un acido débil como de su base conjugada aplica tanto a la proporción de las dos formas como a la cantidad absoluta de cada una presente en una solución dada. Si una solución amortiguadora contuviera una proporción apropiada de acido a base, pero concentraciones muy bajas de ambas, bastaría con que una solución amortiguadora con concentraciones muy bajas de ambas, bastaría con añadir un poco de acido para consumir toda la forma base o viceversa. Decimos que una solución amortiguadora con concentraciones bajas de ambas formas, acida y basica, tiene baja capacidad de amortiguación. Un amortiguador que contiene cantidades mas altas de acido como de base tiene una mayor capacidad de amortiguación.
BIBLIOGRAFÍA: |

Bioquímica. 2003. Campbell, M. K. 4ª edición. Editoriales Thomson. P: 48-55.
Química General Moderna, J. A. Babor y José Ibarra, Editorial Marín, S. A.