PRACTICA 10 TINCIÓN ESTRUCTURAL

Objetivo:
Evidenciar las estructuras de resistencia o esporas del genero bacillus sp

Fundamento teórico
Las esporas bacterianas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores ambientales adversos. Ademas, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el microscopio óptico como estructuras refringentes y de difícil tinción. En general las esporas se tiñen muy difícilmente necesitando colorantes muy concentrados y su fijación con calor.

La tinción específica de esporas requiere dos colorantes:
1 Verde malaquita: capaz de teñir las esporas
2.- Safranina: colorante de contraste que tiñe las bacterias

Las endosporas, tras la primera tinción, no perderan el colorante en el lavado con agua, y sí lo haran las formas vegetativas, que quedaran teñidas con el segundo colorante.
Procedimiento

1. Preparar los frotis
2. Teñir con verde malaquita. Con unas pinzas de madera colocar la muestra encima de la llama del mechero para que el colorante se evapore, pero sin que hierva, durante 5 min. Añadir mas colorante si la muestra se seca.
3. Lavar con agua el resto de colorante.
4. Teñir con safranina 1 min.5. Lavar con agua el resto de colorante.
6. Secar la preparación.
7. Observar la preparación al microscopio.
Material utilizado:
* Microscopio
* Portaobjetos
* Asa de siembra
* Cristalizador
* Cultivo bacteriano: bacillus sp
* Barras paralelas
* Pinzas
* Frasco lavador
* Mechero de alcohol
* Papel de filtro
* Verde Malaquita
* Safranina

Conclusiones
Hemos podido observar las esporas se han teñido de verde y las bacterias de rojo.
Hemos calentado el verde de malaquita sin dejar que se llegara a secar del todo y evitando que se queme pero llegando al desprendimiento de vapores por que asi el colorante penetra mas en las esporas puesto que son muy difíciles de teñir y por lo tanto se fija mejor de esta manera.
Medidas individuales.



Traducción
• Síntesis de un polipéptido • Después de las modificaciones postraduccional se forma una proteína funcional. • Ribosomas bacterianos • Se realiza mediante tres etapas: iniciación elongación y terminación. • Se lee por codones (tripletes de nucleótidos




1.4.1 Fenotipo y Genotipo
• Genotipo : Conjunto de genes que presenta un ser vivo. Es un conjunto de información, una serie de instrucciones concretas mediante las cuales el ser vivo construye su fenotipo. • Fenotipo: conjunto de caracteres morfolóticos, funcionales, bioquímicos, conductales, etc., que presenta un ser vivo. Es hereditario, corresponde a las características de un ser vivo.


1.4.2 Variación Fenotípica
• Afectan a la mayoría de la población • Son reversibles • • • • • Pueden ser: Morfológicas Cromógenas Enzimaticas Patogénicas


1.4.2 Variaciones Genotípicas MUTACIONES
• Mutación: es cualquier alteración permanente en la secuencia de ADN • Son cambios hereditarios • No necesariamente son irreversibles, ya que existen mecanismos de reparación y reversión. • Pueden ser espontaneas o inducidas por agentes mutagenos


Tipo Sustitución: Transición: pirimidina sustituida por pirimidina o purina sustituida por purina

Agente causal Analogos de bases, radiación UV, agentes desaminantes, alquilantes, espotanea.

Consecuencias Si se forma uncodón sin sentido, péptido trunco

Transversión: purina sustituida Espontanea por pirimidina o viceversa Deleción : Macrodeleción: supresión de un segmento grande de nucleótidos Microdeleción o deleción puntual: supresión de 1 o 2 nucleótidos

Si se forma un codón de sentido erróneo, proteína alterada. Péptido trunco

HNO2 , radiación, agentes alquilantes.

Corrimiento del marco de lectura, que casi siempre da lugar a un codón sin sentido y a un péptido trunco.


Adición Macroadición: inserción de un segmento grande de nucleótidos Microadición o adición puntual: inserción de 1 o 2 nucleótidos.

Transposones o secuencias de inserción

Gen interrumpido que da lugar a un producto trunco.

Acridina

Corrimiento del marco de lectura, que casi siempre da lugar a un codón sin sentido y a un péptido trunco.

Inversión

Transposones o secuencias de inserción

Diversos efectos posibles



Transferencia de genes
• Las bacterias intercambian material genético por tres mecanismos : • Transformación • Conjugación • Transducción



Transformación
• Toma de ADN (desnudo) del medio ambiente e incorporación en un receptor de forma heredable



Conjugación
• Esta transferencia es producida por contacto directo de las células dadora y receptora por el pili sexual • Pili sexual esta codificado por el factor F (fertilidad), localizado en un episoma • En bacterias Gram – para la resistencia antimicrobiana y diseminación rapida • En bacterias Gram + para producción de factores de adherencia y resistencia antimicrobiana



Transducción
• Fenómeno por el que se transfiere u Utilización de guantes.
Utilización de bata
Lavarse las manos al finalizar la practica.

Medidas colectivas y para la muestra

Antes de comenzar colocar papel de filtro bajo el microscopio y en la zona de trabajo Limpiar la superficie de trabajo para que no queden residuos
Limpiar los portaobjetos.
Lavarse las manos antes de comenzar.
Se abrieron las ventanas para evitar la inhalación de gases.