IDENTIFICACION DE MACROMOLECULAS
INTRODUCCION
Las macromoléculas son moléculas que tienen una masa molecular elevada,
formadas por un gran número de átomos. Generalmente se
pueden describir como
la repetición de una o unas pocas unidades mínimas o monómeros, formando los
polímeros.
Macromolécula se refiere a las moléculas que pesan más de
10.000 Dalton
de masa atómica. Pueden ser tanto orgánicas como inorgánicas, y
algunas de gran relevancia se encuentran en el campo de la bioquímica, al
estudiar las biomoléculas. Dentro de las moléculas orgánicas
sintéticas se encuentran los plásticos. Son moléculas muy grandes, con
una masa molecular que puede alcanzar millones de UMAs que se obtienen por las
repeticiones de una o más unidades simples llamados 'monómeros'
unidos entre sí mediante enlaces covalentes.
Naturales Caucho, Polisacáridos (almidón - celulosa), Proteínas, Ácidos
nucleicos, Carbohidratos, Lípidos
Artificiales Plásticos, Fibras textiles sintéticas, Poliuretano, Polietileno,
Cloruro de polivilino , Politetrafluoroetileno
Según su estructura molecular Lineales, Ramificados
Según su composición
Homopolímeros: un monómero.
Copolímeros: dos o más monómeros.
Por su comportamiento ante el calor
Termoplásticos: se reblandecen al calentar y recuperan sus propiedades al
enfriar.
Termoestables: se endurecen al ser enfriados de nuevo por formar nuevos
enlaces.
OBJETIVO
El alumno indicara la presencia de macromoléculas en diferentes alimentos.
MATERIAL
 6 tubos de ensayo
 Pinzas para tubo deensayo
 Gradilla
 Baño maria
 Pipetas
 Propipetas
 Tripie
 Tela de asbesto
 Vaso de presipitado
 Mechero de bunsen
 Dextrosa al 1%
 HNO3 consentrado
 NaOH concentrnaado
 CuSO4
 Reactivo de Benedict
 Cristales de difenilamina al 2%
 Sudan III
 Èter
 Agua destilada
 Albùnia de huevo
 Levadura activa (1 gr de levadura activa en 20 ml de agua)
 Aceite vegetal
 Cacahuates molidos
 Mortero con pistilo
MÈTODO
Carbohidratos
A. En un tubo de ensayo vierta 3 ml de solución de glucosa (dextrosa al 1%),
agregue 1ml de reactivo de Benedict, sostenga el tubo de ensayo con una pinza y
caliente ligerament en la flama de un mechero, hasta que adquiera un color rojo
ladrillo.
proteínas
B. Reaccion antoproteica. En un tubo de ensayo vierta
2 ml de albúnia y agregue 1ml de HNO3 concentrado. Observe la formación de un precipitado blanco, caliente el tubo con cuidado y
observe cómo el presipitado se vuelve amarillo.
Enfríe el tubo en el chorro de la llave y agregue NaOH
concentrado, gota a gota hasta que la coloración se vuelva naranjada.
Esta reaccion se basa en la nitración del benceno con HNO3 concentrado
por tanto. Darán reaccion positiva la tirosina y el
triptófano.
[editar] Secuenciación de Maxam-Gilbert
En 1976-1977, Allan Maxam y Walter Gilbert desarrollaron un método para
secuenciar ADN basado en la modificación química del ADN y
posterior escisión en bases específicas[8] Aunque Maxam y Gilber
publicaron su secuenciación química dos años antes del
trascendental artículo de Sanger y Coulson sobre su método de
secuenciación 'mas-menos',[9] [10]
lasecuenciación de Maxam y Gilbert rapidamente se hizo mas
popular hasta que se pudo utilizar ADN directamente, mientras que el método
inicial de Sanger requería que cada comienzo de lectura fuera clonado
para producir un ADN de cadena simple. No obstante, con el desarrollo y mejora del
método de terminación de la cadena (ver mas adelante), la
secuenciación de Maxam y Gilbert ha quedado en desuso debido a su
complejidad técnica, el uso extensivo de productos químicos
peligrosos y dificultades para escalarla. Ademas, a diferencia del
método de terminación de la cadena, los reactivos que se usan en
el método de Maxam y Gilbert no se pueden adaptar para utilizrse en un
kit biológico estandar.
En resumen, el método requiere marcaje radiactivo en uno de los extremos
y la purificación del fragmento de ADN que se desea
secuenciar. El tratamiento químico genera rupturas en
una pequeña proporción de uno o dos de los cuatro
nucleótidos en cada una de las cuatro reacciones (G, A+G, C, C+T).
De ese modo se genera una serie de fragmentos marcados
a partir del
final marcado radiactivamente hasta el primer lugar de 'corte' en
cada molécula. Los fragmentos posteriormente se
separan por tamaño mediante electroforesis en gel, separando los
productos de las cuatro reacciones en cuatro carreras distintas, pero una al
lado de la otra. Para visualizar los fragmentos generados en cada
reacción, se hace una autoradiografía del mismo, lo que
proporciona una imagen de una serie de bandas oscuras correspondientes a los
fragmentos marcados con el radioisótopo, a partir de las cuales se puede
inferir lasecuencia.
Conocido en ocasiones como 'secuenciación
química', este método se originó en el estudio de las
interacciones entre ADN y proteínas (huella genética), estructura
de los acidos nucleicos y modificaciones epigenéticas del ADN, y
es en estos campos donde aún tiene aplicaciones importantes.
[editar] Métodos de terminación de la
cadena
Parte de un gel de secuenciación con marcaje
radiactivo.
Mientras que el método de secuenciación química de Maxam y
Gilbert y el método mas-menos de Sanger y Coulson eran
órdenes de magnitud mas rapidos que los métodos
previos, el método de terminación de la cadena desarrollado por
Sanger era incluso mas eficiente y rapidamente se
convirtió en el método de elección. La Técnica de
Maxam-Gilbert requiere el uso de productos
químicos altamente tóxicos y grandes cantidades de ADN marcado
radiactivamente, mientras que el método de terminación de la
cadena utiliza pocos reactivos tóxicos y cantidades menores de
radiactividad. El principio clave del
método de Sanger es el uso de didesoxinucleótidos trifosfato
(ddNTPs) como
terminadores de la cadena de ADN.
El método clasico de terminación de la cadena o
método de Sanger necesita una hebra molde de ADN de cadena sencilla, un cebador de ADN, una ADN polimerasa con nucleótidos
marcados radiactivamente o mediante fluorescencia y nucleótidos modificados
que terminan la elongación de la cadena de ADN. La muestra de ADN se
divide en cuatro reacciones de secuenciación separadas que contienen los
cuatro desoxinucleótidos estandar (dATP, dGTP, dCTP and dTTP) y
una ADN polimeras
C. Reaccion de biuret. En un tubo de ensayo vierta 2 ml de albúminia, agregue
2ml de NaOH al 10% y mezcle perfectamente, agregue CuSO4 gota a gota hasta que
aparesca coloración de color azul intenso, violeta o púrpura, ésta es una
reaccion común para todas aquellas sustancias que poseen enlaces peptidicos.