MUESTREO DEL AIRE
—Técnica de sedimentación por gravedad
El método de sedimentación en placa Petri ha sido el más ampliamente utilizado
desde que Frankland y Hart lo emplearan por primera vez en 1887. Las placas con
medio de cultivo estéril, permanecen abiertas durante
determinados períodos de tiempo, permitiendo la sedimentación de los
microorganismos. Este método es sencillo y económico. Tiene la ventaja de que se pueden identificar de los cultivos los
microorganismos viables, pero su interpretación es difícil porque no pueden
relacionarse con el volumen de aire muestreado. La deposición varía con
el tamaño y forma de los microorganismos, la velocidad y la turbulencia del
aire. El método no es cualitativa ni cuantitativamente
exacto y nos detecta principalmente los microorganismos que más persisten en el
aire, no detectándose, sin embargo, los microorganismos más pequeños.
— Filtración
La filtración se realiza a través de un material poroso, fibra de vidrio,
alginato
o filtros de membrana (éstos son los más utilizados en la actualidad). Los
filtros recogen los microorganismos por sedimentación, impacto, difusión o atracción
electrostática, dependiendo del tipo.Los filtros de membrana utilizados son de
policarbonato, ésteres de celulosa o cloruro de polivinilo, con un diámetro de
poro desde 0,01 a 10 aŽ§m, según la naturaleza de los bioaerosoles. Para realizar la filtración se han
diseñado aparatos portátiles con una bomba de vacío y un flujo de aire de 1 a
50 litros por minuto (Millipore). Entre los problemas que destacan, encontramos
la pérdida de viabilidad de las células vegetativas debido a la desecación durante el muestreo. En las muestras
obtenidas en los filtros de membrana se pueden estudiar los microorganismos por
microscopía o por cultivo, colocando los filtros en medios de cultivo sólidos,
para determinar el número de colonias.
— Impacto sobre superficies sólidas
Esta técnica es la más usada en la actualidad, los microorganismos se separan
de la corriente de aire utilizando la inercia para forzar su sedimentación
sobre las superficies sólidas. El proceso de impacto depende de las propiedades
de inercia de la partícula ( tamaño, densidad y
velocidad) y de las propiedades físicas del
aparato tales como las dimensiones de la
boquilla y el recorrido del
flujo de aire. Se han diseñado una gran variedad de
aparatos que difierenpor el número de boquillas o impactores, y por el tamaño,
así como el
número de pasos o etapas por las que pasa el aire. En la mayoría de ellos, los
microorganismos quedan retenidos sobre un medio de cultivo sólido contenido en:
placas de Petri de distinto tamaño, 65 o 90 mm (bioMérieux), 100 mm (Andersen y
Burkard) y 150 mm (Casella), en tiras de plástico (Biotest) y en placas de
contacto de 55 ó 84 mm (SAS y Microflow). Después de la
incubación, podemos
I-3 ¿Quiénes pueden ser considerados como partes agraviadas en la hipótesis del artículo 373 letra a del Código Procesal Penal?
En relación con los conceptos recientemente dados es que se ha generado
una controversia en cuanto a determinar quiénes pueden ser considerados
parte agraviada y por tanto legitimados activos, para recurrir de nulidad. En
términos generales podemos señalar que podran recurrir de
nulidad todas aquellas personas que sufran agravio a causa de una sentencia
judicial dictada en el marco de un proceso penal. De
acuerdo con el artículo 372 del
Código Procesal Penal, a través de este recurso, se puede
solicitar tanto la invalidación del
juicio oral y de la sentencia, como
la invalidación de la sentencia solamente.
En la actualidad, y a raíz de la reforma procesal penal, que incluye
como parte del proceso (susceptible de sufrir agravio) al Ministerio
Público, se ha generado una la discusión en torno a la
posibilidad de que éste en su calidad de parte interponga recurso de
nulidad, basandose en la causal establecida por el artículo 373
letra a del Código Procesal Penal. La doctrina nacional se encuentra
divida como
veremos a continuación.
II Desarrollo
II-1 Opinión Doctrinal
Previo a revisar las distintas posiciones de la doctrina, es preciso
diferenciar la legitimidad activa para el caso de la nulidad procesal y para el
caso delrecurso de nulidad propiamente tal.
Legitimación activa Nulidad Procesal
En opinión del profesor Maturana, los requisitos para solicitar la
nulidad procesal son los siguientes:
1) Quién lo intente debe ser interviniente en el proceso;
Artículo 352 del nuevo Código Procesal Penal:
“Podran recurrir en contra de las resoluciones judiciales el
ministerio público y los demas intervinientes agraviados por
ellas, sólo por los medios y en los casos expresamente establecidos en
la ley”
2) Debe haber sufrido un agravio con la dictación de la sentencia
pronunciada en el proceso
3) Debe el recurrente haber experimentado un perjuicio con el vicio en que se
funda el recurso, consistente en la privación de algún beneficio
o facultad procesal dentro del proceso, o con la infracción de la ley
que se incurre en la sentencia.
4) El recurrente debe haber reclamado del vicio que lo afecta
ejerciendo oportunamente y en todos sus grados los recursos que establece la
ley, es decir se debe preparar el recurso.
Por otro lado, y en opinión de los profesores María Inés
Horwitz y Julian López, la nulidad puede ser solicitada en
términos generales, es decir como nulidad
procesal y no como recurso de nulidad, tanto por
quien resulte perjudicado, como
por el tribunal de oficio. El tribunal podra promover el incidente de
nulidad procesal en aquellos casos en que la infracción hubiere impedido
el pleno ejercicio de las garantías y de los derechos reconocidos en la
constitución o enla demas leyes de la República, todo lo
que se extrae del
artículo 163 del
Código de Procedimiento Penal.
Legitimación activa en el nuevo Recurso de Nulidad
En relación con el recurso de nulidad propiamente tal, estos mismos
profesores tratan del tema en los siguientes términos: “En general
la legitimación activa del recurso de nulidad se concede a todos los
intervinientes, de conformidad con lo dispuesto por el artículo 352 del
Código Procesal Penal” y mas adelante señala
“Se ha planteado, sin embargo, el problema de determinar si puede el
ministerio público interponer recursos de nulidad fundados en la
infracción de derechos o garantías, o si, por el contrario su
posibilidad de ejercer tal recurso se encuentra limitada a la hipótesis
de errónea aplicación del
hacer el recuento e identificación de los microorganismos. Basados en
estas técnicas, actualmente existen en el mercado aparatos fácilmente
transportables que se alimentan con pilas para tomar muestras de campo, como
el muestreador centrífugo Reuter RCS Plus (Biotest), el Air Ideal (bioMérieux)
o los sistemas SAS y Microflow. El flujo de aire varía en los distintos
aparatos, desde 10 hasta 700 litros por minuto (Buttner et al. ).
— Borboteo en líquidos
El fundamento es similar al impacto sobre medios sólidos y la fuerza de inercia
es esencial para separar los microorganismos contenidos en el aire y que se
depositen en el medio líquido.El flujo de aire puede ser de 12,5 ó 20 litros
por minuto. Este método tambiénrequiere una bomba de vacío.
Estos dispositivos, también llamados de «trampa líquida», hacen pasar el aire
mediante un aspirador, a través de líquidos
(generalmente soluciones tampón diluidas) que retienen los microorganismos.
Este líquido puede sembrarse en placa para determinar el número de
microorganismos, examinarse microscópicamente (May y Harper, 1957) o analizarlo
con ensayos bioquímicos para determinar endotoxinas(LAL), sondas genéticas,
reacción en cadena
de la polimerasa (PCR) inmunoensayo y por citometría de flujo (Buttner et
al., 1997). No existe un método de muestreo de aire ideal para todas las
necesidades, por lo que para elegir uno deberemos considerar qué queremos
investigar y qué información necesitamos, es decir, deberemos determinar
previamente si nos interesa saber el número total de microorganismos o sólo el
de viables, si deseamos identificarlos y cultivarlos o sólo observar su
morfología microscópicamente, si queremos detectar todos los presentes o sólo
los patógenos, etc.
En función de estas premisas, elegiremos el más adecuado a
nuestras necesidades, por lo que es muy frecuente la utilización de varios
métodos para poder alcanzar el objetivo propuesto.
