ceNTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS NO.82
APLICAR TECNICAS DE VALORACIÓN DEL METABOLISMO
CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA






Introducción
Con objeto de definir químicamente la diabetes los químicos suelen servirse de la respuesta del paciente ante una sobrecarga de glucosa, tal sobrecarga se ha estandarizado.
la glucosa es un azúcar simple presente principalmente en frutas que sirve como fuente de energía para todos los seres vivos.
El organismo animal consume energía de forma continua, mientras que sus ingestas de alimentos son intermitentes.
Este hecho obliga a la existencia de “almacenes de combustibles” que son utilizados en los períodos de ayuno.
Tales reservorios de energía estan representados por los triglicéridos en el tejido adiposo, el glucógeno en el hígado y el tejido muscular y, en menor grado, por las proteínas del músculo. La hormona mas importante en esta capacidad del organismo para el almacenamiento de energía es la insulina, que es secretada en grandes cantidades en el período postabsortivo, favoreciendo con ello la acumulación de glucógeno y la síntesis de triglicéridos, que seran utilizados en los períodos de ayuno. Este “hiperinsulinismo” en respuesta a la ingesta de alimentos es fundamental para los animales que deben permanecer en ayunas durante largos períodos. Para el hombre occidental actual, queno padece períodos de privación de alimentos y que los ingiere varias veces al día, es muy probable que este hiperinsulinismo le resulte perjudicial y que sea una buena parte responsable de la alta incidencia de obesidad y de diabetes mellitus no insulinodependiente (DMNID).

El período postabsortivo –que se extiende desde 4 h después de la ingesta hasta la siguiente– esta representado sobre todo por la pausa nocturna. En estas condiciones el organismo requiere unos 150-200 mg/min de glucosa, que son aportados fundamentalmente por la glucogenólisis y gluconeogénesis hepatica. La glucogenólisis aporta alrededor del 70% del total de la glucosa requerida, mientras que la gluconeogénesis proporciona el resto.

La insulina es la hormona secretada por el pancreas y es la encargada de que la glucosa entre ala célula para que por medio de un proceso sea covertida en energía.
Asi cuando el cuerpo ingiere un alto contenido de carbohidratos responde produciendo insulina para poder absorber las azucares al no haber producción de insulina hay aumento en la sangre de insulina y surge un estado patológico denominado diabetes
La diabetes mellitus no es una afección única, sino un síndrome dentro del cual deben individualizarse diferentes entidades nosológicas. El nexo común de todas ellas es la hiperglucemia y sus consecuencias, es decir, las complicaciones específicas, las cuales son comunes a todas las formas de diabetes.
La diabetes es un trastorno crónico de base genética caracterizado por tres tipos demanifestaciones:
a) un síndrome metabólico consistente en hiperglucemia, glucosuria, polifagia, polidipsia, poliuria y alteraciones en el metabolismo de los lípidos y de las proteínas como consecuencia de un déficit absoluto o relativo en la acción de la insulina.
b) un síndrome vascular que puede ser macroangiopatico y microangiopatico, y que afecta todos los órganos pero especialmente el corazón, la circulación cerebral y periférica, los riñones y la retina.
c) un síndrome neuropatico que puedeser a su vez autónomo y periférico.

Tipos de diabetes
A medida que han ido progresando los conocimientos sobre los factores etiológicos de la enfermedad, la lista de las distintas diabetes se ha ido ampliando, como mas adelante se analizara. No obstante, y dejando aparte a las diabetes secundarias, en la practica clínica se diferencia siempre dos tipos: la diabetes mellitus insulinodependiente (DMID), que se caracteriza por aparecer en general antes de los 30 años, tener un inicio relativamente brusco, tender a la cetosis y precisar rapidamente insulina, y la diabetes mellitus no insulinodependiente (DMNID), que suele afectar a personas obesas y mayores de 40 años; su presentación es a menudo solapada y puede controlarse sólo con dieta largo tiempo, no requiriendo en general insulina.
Los rasgos diferenciales mencionados no siempre se cumplen, de modo que con cierta frecuencia se observan casos
de DMID que comienzan después de los 40 años o formas de DMNID en personas relativamente jóvenes. Las diferencias entre ambostipos no son una cuestión de grado en el déficit insular, sino que existe una auténtica heterogeneidad patogenética.
La diabetes espontanea, pues, se manifiesta por una diversidad de rasgos clínicos y ademas es la consecuencia
de distintos factores etiológicos. Sin embargo, las complicaciones específicas ocurren con gran frecuencia en ambos
tipos de diabetes.

Material

PARA LA EXTRACCIÓN:
Jeringa o vacutainer
Tubo sin anticoagulante
Ligadura
Torundas con alcohol
PARA LA PRACTICA:
Tubos de ensaye de 13x100
Pipetas serológicas de 100 microL
Pipeta automatica de 1 ml (1000 microL)
Gradilla
Un vaso
EQUIPO:
Centrifuga
Baño maria
Espectrofotómetro para lecturas a 505 nm
Cubetas de 1 cm de paso de luz
balanza
MATERIAL BIOLOGICO:
Suero o plasma
PREPARACION DE SOLUCIÓN
75 gr de azúcar
1 limon
350 ml de agua
REACTIVOS:
R1 tampón
TRIS pH 7.4 92 mmol/L
Fenol 0.3 mmol/L
R2 enzimas
Glucosa oxidasa (GOD) 15,000 U/L
Peroxidasa (POD) 1000 U/L
4-Aminofenasona (4-AF) 2.6 mmol/L
GLUCOSE CAL
Patrón primaria acuoso de glucosa 100 mg/dL

TECNICAS

PARA LA EXTRACCION DE SANGRE
1) Se le pide al paciente que tome aciento y que estienda los brazos
2) Se escoge el brazo donde se le vean o marquen mas las venas
3) Ya escogido el brazo se liga (10 cm aprox. arriba de donde se va a hacer la punción)y se le pide que cierre el puño.
4) Se escoge una de las venas del brazo la vena cubital o la radial
5) Se hace la asepxia correspondiente con alcohol
6) Donde se une el brazo con el antebrazo se introduce la aguja usando la otra mano como guía
7) Empezar a succionar la sangre poco a poco ya que si se jala rapido se hemolizan los eritrocitos
8) Ya que se tiene la sangre suficiente se saca la aguja y se le coloca al paciente una torunda y se desliga, se le pide al paciente que doble la mano
9) Depositar la sangre en un tubo sin anticoagulante
10) En esta prueba se hacen mas punciones por lo que se sugiere alternar brazos


PARA LA PREPARACION DE LA SOLUCION
I. Pesar 75 gr de azúcar y colocarlos en un vaso
II. Colocarle 350 ml de agua junto con el limón
III. Mover hasta que el azúcar se homogenice

PARA LA PREPARACION DEL REACTIVO
REACTIVO DE TRABAJO (RT):
1-. Disolver el contenido de un vial de R2 enzimas en un frasco de R1 tampón
2-. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido
*la estabilidad del reactivo es de 1 mes en nevera (2-8 0C) y siete días a temperatura ambiente (15-25 0C
PARA LA DETERMINACION DE CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA
Ya que se tomo la muestra (basal) se le pide al paciente que tome la solución que se preparo durante 5 minutos.
Terminada la ingesta de la solución se cuenta 2 horas para que se tome la siguiente muestra. Muestra 2 (el paciente no debe ingerir alimento
Tomada la 2da muestra se cuentan 2 horas mas para tomar la tercera y ultima muestra.Muestra 3
Ya que se tomo la primera muestra se procede con los siguientes pasos:
1) Esperar a que se coagule la sangre y centrifugarla a 2500 r.p.m xmin
2) Separar todo el suero y clocarlo en un tubo de ensaye.
3) Se coloca la longitud de onda del espectrofotómetro a 505 nm (se pude usar un rango de 490- 550)
4) Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
5) Colocar en 2 tubos marcados, uno como patrón y otro como muestra
6) Depositar en cada tubo 1ml (1000 uL) de RT con la pipeta automatica
7) *Ajustar la pipeta de 100 uL a 10 uL y tomar 10 uL de GLUCOSE CAL 100mg/dL , mezclar con el contenido del tubo marcado como patrón
8) *Tomar el tubo marcado como muestra y depositarle 10 uL de muestra que pude ser suero o plasma.
9) Tomar los dos tubos e incubarlos durante 10 minutos a 37 0C o dejarlos a temperatura ambiente por 15 o 20 min
10) Después de haber incubado se lee la absorbancia del patrón y de la muestra, frente a blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos
Se hace lo mismo con las muestras 2 y 3
11) Reportar el resultado en mg/ dL o mmol/L
12) Hacer la curva que muestre cada resultado






RESULTADOS
La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo; la insulina facilita la entrada de glucosa en las células.
La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucemia causada por un déficit de insulina.
El caso contrario es el aumento en insulina que hace que surja la hipoglucemia que hace que losniveles de glucosa disminuyan
En personas que han ayunado por largo tiempo la glucosa constituye la única fuente energía para el encéfalo y en algunos casos suele estar baja.
TOLERANCIA NORMAL ALA GLUCOSA:
Una persona tiene una respuesta normal de su glucosa a la insulina cuando todos los valores de glicemia fueron menor a 200 mg/dl durante las 2 primeras horas y el nivel de glicemia a las 2 horas después de la ingesta de la solución glucosada fue menor a 140 mg/dl
TOLERANCIA ANORMAL ALA GLUCOSA
Una persona tiene una respuesta anormal de su glucosa a la insulina, es decir , que es intolerante a la glucosa cuando el nivel de glicemia en ayunas fue mayor a 100 mg/dl y menor a 125 mg/dl, pero el nivel de glicemia 2 horas después de la ingesta de la solución glucosada, estuvo entre 140 mg/dl a 199mg/dl
Diabetes: cuando el nivel de glicemia en ayunas es mayor a 126 mg/dl y el nivel de glicemia 2horas después de la ingesta de la solución glucosada es mayor a 200 mg/dl
Diabetes gestacional: cuando los niveles de glicemia, la hora después de la ingesta de la solución es de 180 mg/dl o mas de 155mg/dl o mas 2 horas después y 140 mg/dl después de tomada dicha solución








Calculo de resultado
Absorbancia de la muestra x100 (conc. Patrón ) =mg/dL de gluc. en muestra Absorbancia del patrón
Factor de conversión: mg/dL x 0.0555 = mmol/L



BIBLIOGRAFÍA:
Fisiología medica:
William F. Ganong