Índice.

• Resumen
• Introducción
• Objetivos
• Materiales
• Métodos
• Desarrollo
• Discusión
• Conclusión
• Bibliografía

Resumen.

En este practico se pone a prueba la efectividad de los antisépticos y desinfectantes, que habitualmente utilizamos en procedimientos tan basicos como aseptizar la zona de una punción venosa o la desinfección de un mesón en el cual trabajamos, también se apreciara la capacidad de sobrevivencia que tienen los microorganismos frente a estos.
La correcta implementación de desinfectantes y antisépticos previene la propagación de microorganismos presentes en materia organica como también en materia inorganica. Se puede apreciar que para la realización de los calculos de existir una 100% de efectividad se debe utilizar un numero ficticio (en este caso el numero 1) para así obtener una estadística.

Se plantearan hipótesis las cuales se analizaran a lo largo del trabajo experimental, entre las cuales se encuentran la veracidad de la publicidad de los antisépticos y desinfectantes que se utilizaran en este practico, también se pondra en practica la correcta utilización de estos ya que una mala manipulación puede interferir en los resultados a analizar.

Introducción.

Los microbios hanacompañado al humano durante mucho tiempo, pero estos se han esmerado en buscar e inventar métodos tanto organicos, como inorganicos para combatirlos y como resultado descubrieron los antisépticos y desinfectantes que tienen como objetivo eliminar o inhibir el crecimiento y desarrollo del microorganismo.
Comúnmente los antisépticos se utilizan en materia organica como la piel, ya que no poseen naturaleza tóxica, a diferencia de los desinfectantes que son tóxicos y que se utilizan en materia inerte como mesones, pisos etc.
En este laboratorio se realizara una prueba de efectividad a los antisépticos y desinfectantes aplicandolos en lugares tan comunes como los lugares de punción y el mesón del laboratorio y luego se analizara si su efectividad fue 100% ó simplemente su objetivo no se cumplió.

Objetivos.

• Determinar grado de crecimiento de colonias.

• Calcular porcentaje de sobrevivencia de microorganismos.

• Calcular porcentaje de efectividad de antisépticos y desinfectantes.

Materiales

• 2 Placas de agar sangre.
• Hisopo de algodón estéril.
• Asa Bacteriológica.
• Antiséptico (alcohol 70%).
• Desinfectante (Lysoform).
• Suero Fisiológico.
• Torulas de Algodón.
• Refrigerador.
• Estufa de cultivo.
• Lapiz marcador.

Métodos

• Siembra microbiológica.
• Manejo de material estéril.
• Técnica de siembra estrías en pentagono.
• Incubación en estufa de cultivo a 37° C., por 24 Hrs
• Mantención de cultivos en refrigerador.
• Observación de características morfológicas de los microorganismos.
• Realizar recuento de colonias.
• Determinación deUFC/cm2.
Desarrollo.
Este laboratorio el procedimiento a realizar es el siguiente
Muestra de acción con antiséptico (placa N°1).
Se tomara una muestra pre tratamiento con una tórula estéril humedecida en suero fisiológico, la cual se frotara sobre la zona del pliegue braquial, donde usualmente se toman muestras de sangre venosa (se frota un area aprox. de 1 cm2), luego de haber frotado de forma inmediata se siembra sobre la mitad de una Placa de Petri de agar sangre (control sin antiséptico). Luego se debe limpiar con un algodón humedecido con el antiséptico elegido (alcohol 70°), la misma zona del pliegue braquial que se utilizó inicialmente, se debe dejar actuar por 30 segundos a lo menos, y de forma inmediata se toma la muestra para cultivo de esa misma zona, con una tórula estéril humedecida en suero fisiológico que posteriormente utilizara para la siembra en zig-zag en la otra mitad de la placa de agar (mitad experimental).
Muestra de acción de Desinfectantes (placa N°2).
Se realizara lo mismo que con el antiséptico, es decir, con una tórula estéril humedecida en suero fisiológico se frotara un area de 1 cm2 de una superficie inanimada, en este caso utilizaremos el mesón de trabajo, y se sembrara sobre una placa en forma zig-zagueante en la mitad control (sin desinfectante). Luego se limpiara con una solución desinfectante, en este caso se utilizara Lysoform, el cual se aplicara sobre la misma area de trabajo anterior, se dejara actuar aprox. Por 3 minutos, posteriormente con una tórula estéril humedecida en suero fisiológico frote varias veces esa area y siembre sobre laotra mitad de la placa de agar sangre en forma zig-zagueante (mitad experimental), si luego de haber esperado el tiempo indicado queda sobrante de desinfectante se puede limpiar con una torula de algodón.
Luego las placas seran selladas y rotuladas, donde posteriormente se incubaran de forma invertida (el agar hacia arriba) a 37 °C por 24 horas, luego se llevaran al refrigerador hasta el siguiente laboratorio, el cual consistira en evaluar los resultados de esta experiencia.
La segunda parte consiste en cuantificar UFC/cm2, se calculara el porcentaje de sobrevivencia y el porcentaje de efectividad, con las siguientes formulas
% sobrevivencia = Recuento posterior X 100 %
Recuento pre
% efectividad = 100 % - % sobrevivencia
Nuestro recuento de colonias fue el siguiente
Mesón:
Cantidad de colonias Características
9 Blancas y circulares.
1 Rosada y circulare.
1 Café, elevada y porosa.
2 Anaranjada y circulares.
Total: 13 colonias.

Por lo que
% de sobrevivencia = 1 X 100% = 1,6949%
13
% de efectividad = 100% - 1,6949% = 98,3051 %
Brazo:
Cantidad de colonias Características
39 Blancas.
8 Amarillento claro y elevadas.
12 Transparentes.
Total: 59 colonias.

% de sobrevivencia = 1 X 100% = 7 %
59
% de efectividad = 100% - 7,6923% = 92,3077%
Discusión.

En este laboratorio se utilizaron antisépticos y desinfectantes, arrojando resultados esperados, puesto que en los dos casos estos actuaron de forma 100% efectiva puesto que altomar una muestra control en la que en un comienzo arrojo el desarrollo de colonias microbianas y que posteriormente con la aplicación de estos antisépticos y desinfectantes fueron totalmente eliminadas. Los mecanismos de acción mas importantes que poseen estos, son
Antisépticos:
• Producen muerte o inhibición celular, en las bacterias por oxidación, hidrólisis e inactivación de enzimas con pérdida de constituyentes celulares, son mas efectivos y son los únicos que se pueden utilizar en tejidos vivos.
Desinfectantes
• Actúan como desnaturalizantes de proteínas, inhiben las enzimas y producen muerte celular, son muy potentes, rapidos, mas termoestables que los antisépticos y generalmente muy tóxicos.
Su utilidad clínica es muy recurrente puesto que cuando se trabaja con pacientes es muy común la utilización de estos para lograr la muerte y la eliminación de todos los microorganismos con el objetivo de disminuir las infecciones intrahospitalarias.
El Coeficiente fenólico, es un valor experimental que se realiza a las sustancias que tienen propiedades biocida, tomando como referencia la capacidad biocida del fenol. El método estandarizado para obtener el valor del coeficiente fenólico, es una modificación de la técnica de dilución en tubo, en la cual se prepara una serie de tubos conteniendo cada uno 5 ml de diferentes diluciones del desinfectante. A la vez se prepara una segunda serie de tubos que contengan diferentes diluciones de fenol. Cada tubo de las dos series se inocula con 0 ml de un cultivo de 24 horas del microorganismo utilizado como prueba (cepas específicas deSalmonella typhi o Staphylococcus aureus). A los 5, 10 y 15 minutos se recoge una cantidad alícuota de cada tubo que se inocula en otro tubo que contenga medio de cultivo estéril. Estos tubos inoculados se incuban durante 24 a 48 horas y se observa el crecimiento del microorganismo (aparición de turbidez). La mayor dilución del desinfectante que mate a los microorganismos en 10 minutos pero no los mate en 5 minutos se divide por la dilución mayor de fenol que dé los mismos resultados.

Conclusión.

En el trabajo realizado en el laboratorio se logró determinar el grado de crecimiento de colonias en lugares tan comunes como la piel de los brazos y el mesón de laboratorio, viendo así su desarrollo en el agar y posteriormente su eliminación con la acción emitida por los antisépticos y desinfectantes, también se logró calcular el porcentaje de sobrevivencia de microorganismos y el porcentaje de efectividad de los antisépticos y desinfectantes.
Estos calculos fueron realizados con el conteo total de colonias que existían al momento de tomar la muestra y luego el conteo realizado posteriormente al momento de aplicar el antiséptico ó el desinfectante, dependiendo del caso.
Con este laboratorio se logró ver que los antisépticos y desinfectantes son variables, ya que en ocasiones su acción es 100% efectiva y que en otras sólo disminuye la cantidad de microorganismos.

bibliografía.

• Guía de laboratorio: “Acción de Antisépticos y Desinfectantes”.

• Libro “Microbiología Médica”. Murray P., Kobayashi, G. Pfaller, M. y Rosenthal K. Ed. Harcourt Brace S.A. España. Quinta edición 2006.