biología molecular
RECONOCIMIENTO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO.
INTEGRANTES

DOCENTE: TANIA DE LA HOZ

OBJETIVO GENERAL:
El objetivo general de este laboratorio es que como estudiantes podamos identificar el funcionamiento de cada una de las partes del microscopio aplicadas a la biología celular.

OBJETIVO ESPECIFICO:
* Que lo estudiantes reconozcamos las partes del microscopio y el poder de resolución de este frente al ojo humano.
* Que el estudiante comprenda la importancia del microscopio para toda investigación científica.

INTRODUCCION
En este laboratorio uno de los objetivos esenciales es el conocimiento del microscopio y toda la ayuda que este brinda a toda investigación científica.
Desde su invención, el microscopio ha sido una herramienta de gran importancia en el desarrollo de las distintas investigaciones científicas. Si bien es un complemento esencial del sentido de la visión del ser humano, pues nos permite aumentar nuestro poder de resolución.
El microscopio esta compuesto basicamente por dos sentidos de lente: un ocular y un objetivo, ademas de todo el sistema mecanico encargado del soporte.
Dentro de los componentes no ópticos del microscopio se encuentran la base o pie y el brazo, los cuales en su conjunto se denominan estativo.
MATERIALES Y EQUIPOS
1. Hilos de colores (verde, amarillo y rojo
2. Código de barras
3. Pedazos de papel impreso (revista o periódico
4. Papel milimetrado
5. tijeras
6. Goteros
7. Laminas porta
8. Cubreobjetos
9. Microscopio óptico
PROCEDIMIENTO
* VISUALIZACIÓN DE LA IMAGEN INVERTIDA, MOVIMIENTO Y PODER DE RESOLUCIÓN
1. Analisis de la letra “a” en el microscopio:

De una revista se corto una letra a minúscula, lo mas pequeña posible, se procedió a colocar en el porta objetos completamente y limpio y se le agregó una gota de agua con ayuda del gotero (a esto se le llama montaje húmedo). Luego, se espero a que e papel se mojara totalmente, se mantuvo el cubre-objetos en un angulo de 45° respeto al porta objetos y se dejo caer suavemente sobre la muestra, de manera que el agua quedo distribuida uniformemente. Se aplico una ligera presión sobre el cubre-objetos con el fin de eliminar las burbujas de aire q pudieron haberse formado.
Se coloco el montaje sobre la platina de tal manera que la letra quedo en posición derecha a la lectura.se movió el porta objetos de tal modo que la letra quedó en el centro del orificio de la platina. Se enfocó con el objetivo 4X y se describió lo que se observó en el microscopio así con el mismo procedimiento se enfocó con los distintos objetivos.
RESULTADO
Se observó la letra invertida con el mismo esquema de la letra y con unos puntos negros enlazados entre si del mismo tamaño.
2. Analisis de el código de barras

De una revista, se cortó el código de barras y precedimos a realizar el montaje húmedo, luego llevamos el montaje sobre la platina y observamos con los diferentes objetivos.
Objetivo en 4X: con este objetivo pudimos observar pequeñosespacios entre las distintas líneas del código de barras y observamos también que a estas les aumenta el tamaño mas no cambia mucho su apariencia de un solo trazo.
10X: en este objetivo se disminuye el campo visual de la muestra y en una parte del código notamos colores como: verde, rojo, azul y amarillo.
40X: en este objetivo el campo visual disminuyó tanto que llego al punto en que solo pudimos observar una parte de una línea del código de barras.

* VISUALIZACIÓN DEL GROSOR Y PROFUNDIDAD
1. Analisis de los hilos de colores:

Para este procedimiento, se cortaron 3 hilos de distintos colores de aproximadamente 2 cm; luego se ubicaron el portaobjetos de manera cruzada y logrando que este montaje quedara en el centro del campo.
Los colores fueron distribuidos de tal manera que el hilo rojo quedo horizontal y tanto el verde como el amarillo quedaron de manera diagonal, giramos el revolver observando la muestra con los distintos objetivos buscando que esta quedara ante nuestra visión completamente nítida con ayuda de los tornillos micrométricos y macrometrico.
RESULTADO
Al finalizar este procedimiento pudimos concluir que no todos los hilos se pueden observar nítidamente en los diferentes enfoques, y ademas concluimos que a mayor aumento los detalles aumentan y por tanto en los hilos observamos distintas hebras que a simple vista nosotros no detallamos por tanto confirmamos que el poder de resolución aumenta en gran cantidad.
* MEDICIONES MICROSCOPICAS

1. Analisis del papelmilimetrado:

Para este procedimiento se cortó un pedazo de papel milimetrado de 1cm2 y armamos el montaje húmedo.
RESULTADO:
se observo que el diametro del campo visual es inversamente proporcional al poder de aumento de los objetivos, por tal motivo cuando se utilizo el objetivo de 4X de alcanzaron a observar 4 cuadriculas de 1cm2 y a medida que se aumentaban los objetivos disminuían dichas cuadriculas y a su vez el campo visual.

ANALISIS GENERAL
Para cada montaje que se realizo en el microscopio se pudo constatar que a mayor aumento en los objetivos menor campo visual y con esto mayor poder de resolución, por tal motivo se pueden observar cualidades que nuestro poder de resolución no nos permite observar.

CONCLUSION

Para concluir podemos decir que el microscopio es de gran utilidad para el ser humano ya que consta con varios objetivos que nos permiten observar imagenes mas alla de muestro poder de resolución y este es de gran importancia para las investigaciones científicas que a diario se van desarrollando.
Ademas con nuestra experimentación pudimos conocer uno a uno las funciones de cada parte del microscopio y comprobar que este instrumento fue una de las invenciones mas útiles para el ser humano.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS:

1. MENCIONE LOS DIFERENTES TIPOS DE MICROSCOPIO Y REALICE UNA BREVE DESCRIPCION DE CADA UNO DE ELLOS.
RTA:
Microscopio compuesto: es un aparato óptico hecho para agrandar objetos, consiste en un número de lentes formando la imagen por lentes o unacombinación de lentes posicionados cerca del objeto, proyectandolo hacia los lentes oculares. El microscopio compuesto es el tipo de microscopio mas utilizado.
Microscopio óptico
También llamado 'microscopio liviano', es un tipo de microscopio compuesto que utiliza una combinación de lentes agrandando las imagenes de pequeños objetos. Los microscopios ópticos son antiguos y simples de utilizar y fabricar.
Microscopio fluorescente:
Es un tipo especial de microscopio liviano, que en vez de tener un reflejo liviano y una absorción utiliza fluorescencia y fosforescencia para ver las pruebas y sus propiedades. Microscopio electrónico: Es uno de los mas avanzados e importantes tipos de microscopios con la capacidad mas alta de magnificación. En los microscopios de electrones los electrones son utilizados para iluminar las partículas mas pequeñas. El microscopio de electrón es una herramienta mucho mas poderosa en comparación a los comúnmente utilizados microscopios livianos. Microscopio estéreo: También llamado 'microscopio de disección', utilice dos objetivos y dos oculares que permiten ver un espécimen bajo angulos por los ojos humanos formando una visión óptica de tercera dimensión.
2. ¿Por qué la imagen del microscopio óptico aparece invertida? Explique
RTA
El principal causante de este efecto es un prisma de cristal que se encuentra en el interior del microscopio (a la altura de la base del ocular), la función de este prisma es concentrar la luz o imagen aumentada por los objetivos ydirigirla hacia los oculares.
Actualmente existen microscopios que tienen un segundo prisma que reinvierte la imagen para corregir esta inversión.

3. Que sucede con el campo de observación cuando se aumenta el objetivo? Y la iluminación? Explique
RTA
Ya que el campo visual es indirectamente proporcional al poder de resolución al aumentar uno el otro disminuira, por tanto, al aumentar el objetivo aumenta el poder de resolución y a su tiempo disminuye el campo visual.

4. ¿a que se debe que las letras del periódico o el código de barras de las revistas sean vistas uniformemente impregnada de tinta por nuestros ojos?
RTA
Este fenómeno se debe a que nuestro poder de resolución es relativamente pequeño frente a un microscopio, por tanto nuestro poder de resolución no nos permite ver detalladamente lo que sucede con esta situación.

5. Cuales técnicas se utilizan en la microscopia electrónica, tanto en la preparación de muestras como en el montaje.
RTA:
* Fijación: tratamiento químico para matar a las células de modo que quedan como eran in vivo, y que las moléculas queden fijadas, que no se eliminen/ laven en manipulaciones posteriores.
* Seccionado: se corta el tejido muy fino, de forma que lo atraviese la luz. Para ello se emplean los MICROTOMOS, estos pueden ser
De mano: la muestra debe incluirse en un medio, la médula de saúco (de sauce, Salix).
De parafina: incluir la muestra en parafina, una especie de cera. Antes la muestra tiene que pasar un proceso: deshidratación, seimpregna con disolvente Xilol/Xileno) de parafina, este junto a la parafina, y parafina únicamente.
De congelación: la muestra se impregna de nitrógeno líquido, y luego se corta con cuchilla de acero. Es el procedimiento mas rapido.
* Tinción: si el tejido es casi transparente hay que añadirle colorantes para permitir la visión. Normalmente se emplean mas de un colorante de diferente color y también químicamente distintos. Esta es una sustancia química que reacciona con unas moléculas determinadas del tejido, quedandose fijado, así se obtiene el contraste.
* Montaje de la preparación: se montan los diferentes cortes en el portaobjetos. Habitualmente se emplea el cubreobjetos, entre porta y cubre no debe haber aire. Dependiendo de la duración, la preparación puede ser: Temporales: se emplea agua y otras substancias.
Permanentes: indefinidas, se emplean balsamo de Canada y resinas.
Microscopios electrónicos:
* Fijación: tiene mucha importancia. Se sigue el mismo proceso que en la microscopía óptica.
* Seccionado: los cortes, muy finos, son atravesados por electrones (muy poco poder de penetración). Se usan los ultra micrótomos, para poder emplearlos se debe incluir la muestra en una resina muy dura (polimerizada). La resina pasa por dos estados
Como monómeros (unidades): moléculas muy grandes. La sustancia es fluida, pero viscosa, debido al choque y unión de estas grandes moléculas. La inclusión de la muestra, se produce en este estado.
Como polímeros (unión de unidades): sonmonómeros unidos fuertemente. Tiene estado sólido, es muy duro. Cuando, se impregna con disolvente de resina, este junto a la resina, y resina únicamente. Cuando la resina esta en este estado se puede cortar. Se emplean cuchillas de vidrio o de diamante. Los cortes se recogen en una minipiscina
* Montaje de la preparación: en una rejilla de cobre, que actúa como red en la mini piscina. La rejilla es el portaobjetos. Se usa cobre porque los tejidos se adhieren bien.
* Tinción: se tiñe siempre, aunque sin colorantes. En este caso se emplean metales pesados, ya que estos atomos pesados desvían a los electrones, mientras que los atomos ligeros no lo hacen. Y porque la materia viva esta formada por atomos ligeros (C, N ,O). Estos metales pesados se introducen formando parte de sustancias químicas, reaccionan selectivamente con las moléculas de una célula.
1. Osmio (Tetróxido de Os): es un fijador y un colorante, pone negra la muestra en un principio. Reacciona con: lípidos, proteínas y polisacaridos. Fija a: membranas (lípidos y proteínas), citoplasma (proteínas), granos de glucógeno (animal), granos de almidón (vegetal).
2. Plomo (Citrato de Pb): refuerza la acción del osmio.
3. Uranio (Acetato de Uranio): reacciona con los acido nucleicos.

6. ¿que es un microscopio invertido? ¿Para que se utiliza?
RTA
Microscopio invertido:
es un microscopio con su fuente de luz y condensador en la tapa, sobre la etapa que señala abajo, mientras que objetivos y la torrecilla esta debajo de la etapaque señala para arriba. La fuente de luz en este microscopio utiliza una lampara del hidrógeno de 12V 1000watter y el wavelenght se puede cambiar automaticamente. Los microscopios invertidos son útiles para observar células u organismos vivos en el fondo de un envase grande (e.g. a cultura del tejido fino frasco) bajo condiciones mas naturales que en una diapositiva de cristal, al igual que el caso con un microscopio convencional.
7. ¿cuales son los limitantes del microscopio de luz y el microscopio electrónico?
RTA
En el microscopio de luz su factor limitante es la longitud de onda de la luz.
Microscopio electrónico
El limitado diametro de la apertura no permite que la información detallada alcance la imagen, limitando de este modo la resolución.
El contraste de fase (que radica en la naturaleza ondulatoria de los electrones) se debe al contraste de interferencia provocado por los desplazamientos en las fases relativas de las porciones del rayo. Es un contraste dominante en especímenes finos.
Existen también distintas aberraciones producidas por las lentes: astigmatica, esférica y cromatica
El problema de la función de transferencia de contraste (CTF): la CTF describe la respuesta de un sistema óptico a una imagen descompuesta en ondas cuadraticas.
8. ¿Por qué se debe utilizar colorantes a la hora de observar muestras en el microscopio? Cuales deben ser algunas de las propiedades de los colorantes de uso común en microscopia.
RTA
La coloración trata de posibilitar el estudiomorfológico oestructural, sin que se pueda obtener mayor información sobre la naturaleza química de las estructuras observadas.

La histoquímica utiliza métodos tendientes a identificar a un determinado tipo de molécula o sustancia, visualizandola microscópicamente.
La mayoría de los colorantes citológicos o histológicos son de naturaleza organica y aromatica. Se reconocen dos tipos de colorantes: basicos y acidos. En los colorantes basicos el grupo que imparte el color (grupo cromóforo) es basico (catiónico). Por ejemplo, el azul de metileno es el clorhidrato de tetrametiltionina, en el que la parte acida (ClH) es incolora. Algunas veces los dos componentes de la sal son cromóforos, como en el caso del eosinato de azul de metileno. El grupo por medio del cual el colorante se combina con el tejido se designa auxocromo. La coloración rutinaria mas empleada es la combinación de un colorante basico (hematoxilina) y uno acido (eosina). Característicamente la hematoxilina colorea los núcleos y el retículo endoplasmatico rugoso y la eosina colorea los citoplasmas y la mayoría de los elementos fibrilares del espacio intercelular.


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