El inyector de muestra
que se me ocurrió
Al recipiente lleno con de la solución de trabajo (ST), se vacía
con la inyectadora colocada en la parte inferior de éste (colr en crema
en la figura). A continuación, con ayuda de una micro-inyectadora se inyecta
la muestra (en azul), través de un tubito vertical cercano al capilar el
cual tiene un agujero lateral en su parte inferior; cuando sale la gota de la
muestra por el agujero, esta “toca” el capilar y la muestra entra
por difusión dentro del capilar. Se procede a lavar con solución
trabajo, sacando con ayuda de otra inyectadora los lavados y finalmente, se
repone la ST en el recipiente. Las inyectadoras, puede estar conectada al
recipiente a través de un tubito de PVC u otro
material plastico, por lo que puede estar colocada en el panel del instrumento.
La ventaja tiene este sistema son: Primero es sencillo
de construir, y en segundo lugar, todos los componentes al estar fijos, se
evita romper el capilar. Otra ventaja es que la muestra puede
entrar mas concentrada al capilar.
El inconveniente si es que lo hay, es que el tiempo de difusión de la
muestra dentro del capilar, debe ser siempre igual para la muestra en
cuestión habría que hacer pruebas para la su precisión
de este sistema.
Publicado por Fundado en 1983 en 13:47 0 comentarios
lunes 29 de noviembre de 2010
El Inyector
Lamejor manera que he encontrado para introducir la muestra es a través
de una copita tal como se indica en el diseño anexo(1). La ventaja de este sistema es que permite la introducción en el
capilar tanto de aniones y cationes como
también de compuestos neutros. Por otra parte, no
ocurre una introducción selectiva de cationes y aniones debido a
diferentes estados de oxidación.
Por la entrada del
capilar, se coloca una llave de paso que trae la solución soporte (SS)
desde un frasco dosificador o la muestra.
Después de que el capilar comience a gotear la SS que entra por la
salida del
capilar, se llena el embudito con la SS que contiene el frasco dosificador.
Cuando el embudo empiece a rebosarse se cierra la llave de paso
deteniéndose la adición de la SS y si los niveles de la SS de los
recipientes de entrada y salida se encuentran a nivel, el flujo
hidrodinamico, debe cesar.
Para la inyección de la muestra
Se gira la llave de paso hacia la solución de muestra por unos segundos,
hasta que en la salida de la copa, salgan una o dos gotitas y a
continuación se procede a pasar la SS, que arrastrara la muestra
hasta el capilar. Esta etapa es crítica y requerira un proceso de calibración.
Para evitar inconvenientes en la ruptura del capilar, las diferentes piezas
de este sistema debe estar pegadas con goma loca, soldimix, etc. El frasco de
SS debe estaren un soporte, la llave de paso fija al
chasis del
equipo.
Retomando la electroforesis capilar
Como en estos momento estan funcionando y
practicamente los instrumentos en el Laboratorio cubren las necesidades del
mercado, me dedicaré al estudio e implementación de la
técnica de electroforesis capilar. Se ira
anotando los resultados que vaya obteniendo.
Lo primero es construir un capilar por el
procedimiento indicado en una entrada anterior; se le va a colocar una camisa
para enfriamiento con agua y para comenzar, hacer pruebas de movilidad de iones
con soluciones buffer-LSNa para que estas sean arrastradas por el flujo electro
forético. El flujo electroforético, puede variar dependiendo del
pH y de la concentración de detergente aniónico (Laurilsulfato de
Na) e incluso invertirse utilizando detergentes catiónicos.
Para poder apreciar el FEF es necesario que la muestra sea coloreada, tener un detector, o que se pueda ver gotear la solución
por un extremo del
capilar. Si se quiere ver gotear la solución, habría que hacer un
“pozo” con buffer, el catodo del
alto voltaje y una salida del
capilar ( Fig. adjunta).
El problema con esta última opción es que se generan burbujas de
gas dentro del
capilar. Para evitar las burbujas, se fractura el capilar, se medio pegan los
dos pedazos y se rodea por una membrana con baja resistencia
(celofan), demanera de hacerle un escape a la corriente, pero no a la
solución.
El detector que vamos a construir es el externo de alta frecuencia MHz). Tiene la ventaja de que es sencillo, esta
aislado del
alto voltaje, no toca la solución y ademas es muy sensible. Ya
dimos algunos detalles en la entrada del 2008.
Voy a utilizar como
fuente de poder la de 400 V y ver como
se comportan las soluciones bajo las condiciones anteriores. Luego
utilizaré la fuente de alto voltaje con la bobina de carro, el flayback
y finalmente se utilizara un doblador de
voltaje con el que espero lograr un voltaje de unos 20 kV. La ventaja del alto
voltaje es doble: en primer lugar, aumenta la resolución de los
“picos” y en segundo lugar, la corriente que circula se hace menor,
así, si duplicamos el voltaje, por conservación de la
energía, la corriente disminuye a la mitad, lo cual evita el
calentamiento del buffer dentro del capilar. Para minimizar el calentamiento del
capilar, le colocamos una camisa por la que circula agua que cae por gravedad
desde un frasco de “sueros”.
Quedaría por construir el sistema para cargar la muestra, pero eso es
mas adelante, según los resultados a
obtener. Inicialmente se vaciara una de las copas y se llena con la
muestra. Se lava bien la copa con agua destilada y a continuación se
llena con el buffer a utilizar.
El Alto Voltaje
Enprimer lugar vamos a la fuente de voltaje: Como el equpo funciona con un
alto voltaje, lo que se nos ocurrio fue usar un flayback de TV.
Lograndose un voltaje de unos 15 kV. En nuestro
primer diseño, el voltaje no era muy estable (funcionaba con un diodo) razón por lo cual hicimos un puente con 4
diodos (de micronda) y mejoró su estabilidad. Hay otros circuitos que
emplean 2 transistores
El capilar
Inicialmente estabamos trabajando con un capilar de un termómetro, pero
este se nos rompio (vida infra) y decidimos construírnos un capilar en
barbotina con sus recipientes para colocar el buffer y a manera de cruz el
capilar para 'inyectar la muestra'. Tal como se indica en el
dibujo anexo. Las primeras pruebas indicaron que esposible: un
alambre de cobre de unos 100 micrones de diametro sirve de molde. Al
quemar la barbotina, este se 'evapora' y
queda el capilar. El problema es que la porcelana queda porosa y estamos
estudiando otras alternatiavas: Con un capilar de vidrio al que se la ha
insertado un alambre de cobre de 0 mm de
diametro, se 'forra' con barbotina y se quema a 1200 ºC;
a esa temperatura el cobre se 'evapora' y queda el tubito de vidrio
que es impermeable otra posibilidad es hacer el capilar por estiramiento
rapido de un tubo de unos 5 mm de diametro y vaciarle resina.
EL DETECTOR
Hay varios tipos de detectores que pueden serfacilmente
construídos en un Laboratorio: El de
conductividad, el fotocolorimétrico, el voltamétrico y el de
oscilometría. Debido al alto voltaje que pasa a través del
capilar, el que menos interferencias presenta es el fotocolorimétrico
que funciona con un led y el de oscilometría.
Detector oscilométrico.
El principio es muy sencillo, se coloca un alambre de
cobre envolviendo el capilar y a un miímetro de distancia se colocan
otra espira. Las espiras se forran con estaño, a una de las espiras se
le aplica una señal de unos 125 KHz, la segunda espira se encuentra
apartada 1 mm de la anterior. La segunda espira funciona como una antena y la
intensidad de la señal captada se encuentra influenciada por los iones
que pasan por el capilar. Esta señal es amplificada,
rectificada y filtrada.
En el diagrama que se presenta a continuación es el diseño que
nosotros hemos realizado si hay otro igual, es pura coincidencia
Electroforesis de dos dimensiones
El novedoso sistema de electroforesis 2D de Hoefer Inc. incluye: la unidad de
enfoque isoelectrico de primera dimension IEF100 y la unidad de electroforesis
de gel de segunda dimensión SE900. La IEF100 ayuda a incrementar la
calidad y velocidad de las separaciones
y el diseno de un solo tanque de la SE900 asegura
corridas libres de fugas y la posibilidad de reutilizar la solucion
amortiguadora.
