Actividad sobre hibridación
es un proceso por el cual se combinan dos cadenas de acidos nucleicos
anti paralelas y con secuencias de bases complementarias en una única
molécula de doble cadena, que toma la estructura de doble hélice,
donde las bases nitrogenadas quedan ocultas en el interior. Esto hace que si
irradiamos la muestra con la longitud de onda a la que absorben estas bases
(260 nm), la absorción de energía sera mucho menor si la
cadena es doble que si se trata de la cadena sencilla, ya que en esta
última los dobles enlaces de las bases nitrogenadas, que son las que
captan la energía, estan totalmente expuestos a la fuente emisora
de energía.
se uniran con sus complementarios bajo
condiciones normales: A=T; A=U; C G; G C; T=A ó U=A
Así que dos cadenas perfectamente complementarias se uniran la
una a la otra rapidamente. Por el contrario, debido a las diferentes
geometrías de los nucleótidos, una simple variación de las
parejas anteriores lleva a inconsistencias entre las
cadenas y dificultara la unión.
El proceso de hibridación se puede revertir
simplemente calentando la disolución que contiene la molécula.
El porcentaje de GC dentro de la cadena condiciona la temperatura de
alineamiento y de desnaturalización ya que G se une a Cmediante tres
puentes de hidrógeno y A se une a U o T mediante dos puentes de
hidrógeno; por tanto, y dado que se requiere mas energía
para romper tres enlaces que para romper dos, dicha energía se traduce
en una mayor temperatura. El %GC no es igual para todas las especies, es
mas, el %GC es distinto incluso entre el ADN nuclear y el ADN
mitocondrial, lo que nos da bastante juego en los protocolos de
extracción de ADN, según qué tipo vamos a estudiar y esto
es importante, entre otros motivos porque existen enfermedades genéticas
debidas a mutaciones en el ADN mitocondrial.
En biología molecular experimentalmente se llevan a cabo dos tipos
diferentes de hibridación: Tipos, para uniones ADN-ADn, para uniones
ADN-ARN.
Procedimiento
experimental
1.
La hélice de doble cadena (ADN) es separada mediante un proceso
físico (calor) o químico (con una base fuerte, como . Esto rompe los enlaces por que mantienen unidas las dos
hebras del ADN.
2. Las dos hebras complementarias se separan, el ADN .
3. Una muestra de cadenas simples (o desnaturalizadas) se mezcla con otra
muestra de cadenas simples.
4. La muestra combinada se enfría lentamente, las moléculas
sencillas se van emparejando por las zonas complementarias (mas estables
y se va formando unanueva molécula hibridada
es un proceso por el cual se combinan dos cadenas de acidos nucleicos
antiparalelas y con secuencias de bases complementarias en una única
molécula de doble cadena, que toma la estructura de doble hélice,
donde las bases nitrogenadas quedan ocultas en el interior. Esto hace que si
irradiamos la muestra con la longitud de onda a la que absorben estas bases
(260 nm), la absorción de energía sera mucho menor si la
cadena es doble que si se trata de la cadena sencilla, ya que en esta
última los dobles enlaces de las bases nitrogenadas, que son las que
captan la energía, estan totalmente expuestos a la fuente emisora
de energía. se uniran con sus
complementarios bajo condiciones normales: A=T; A=U; C G; G C; T=A ó U=A
Así que dos cadenas perfectamente complementarias se uniran la
una a la otra rapidamente. Por el contrario, debido a las diferentes
geometrías de los nucleótidos, una simple variación de las
parejas anteriores lleva a inconsistencias entre las
cadenas y dificultara la unión.
El proceso de hibridación se puede revertir
simplemente calentando la disolución que contiene la molécula.
El porcentaje de GC dentro de la cadena condiciona la temperatura de
alineamiento y de desnaturalización ya que G se une a C mediante
trespuentes de hidrógeno y A se une a U o T mediante dos puentes de
hidrógeno; por tanto, y dado que se requiere mas energía
para romper tres enlaces que para romper dos, dicha energía se traduce
en una mayor temperatura. El %GC no es igual para todas las especies, es
mas, el %GC es distinto incluso entre el ADN nuclear y el ADN
mitocondrial, lo que nos da bastante juego en los protocolos de
extracción de ADN, según qué tipo vamos a estudiar y esto
es importante, entre otros motivos porque existen enfermedades genéticas
debidas a mutaciones en el ADN mitocondrial.
En biología molecular experimentalmente se llevan a cabo dos tipos
diferentes de hibridación: Tip para uniones ADN-ADN y tipo
, para uniones ADN-ARN.
Procedimiento experimental
1. La hélice de doble cadena (ADN) es separada mediante un
proceso físico (calor) o químico (con una base fuerte, como . Esto rompe los enlace que mantienen unidas las dos
hebras del ADN.
2. Las dos hebras complementarias se separan, el ADN se
3. Una muestra de cadenas simples (o desnaturalizadas) se mezcla con otra
muestra de cadenas simples.
4. La muestra combinada se enfría lentamente, las moléculas
sencillas se van emparejando por las zonas complementarias) y se va formando una nueva molécula hibridada
