TRIPSINA

RESULTADOS Y OBSERVACIONES

A las 2:00 pm la mezcla de gelatina y la solución tripsina se agito durante 2 segundos e inmediatamente se llevo a un baño maria de 37S C

2:00pm: se tomaron 10 ml de la mezcla y se puso a hervir a fuego directo por 2 minutos para poder destruir la enzima ya que esta enzima(tripsina) es inhibida por el calor a fuego directo pero esta inhibición por claro o desnaturalizase es irreversible. Esta primera mezcla gelatina + tripsina es la llamada muestra de tiempo. Después de herirla por 2 minutos se enfrió con agua corriente de la llave y se le añadieron 15 ml de la solución de formol neutralizado y 5 gotas de la solución de fenolftaleina. Se titulo con NaOH al 0.02 N hasta obtener un color rosa ( el cual debió ser igual en las demás titulaciones) El resultado de la titilación fue de 18 ml.

2:10 pm: Se tomaron otro 10 ml de las muestra y Se le dio el mismo tratamiento y procedimiento anterior obteniendo un resultado en la titilación de 23 ml2:10 pm: Se tomaron otro 10 ml de las muestra y se le dio el mismo tratamiento y procedimiento anterior obteniendo un resultado en la titilación de 23 ml

2:20 pm: Se tomaron otro 10 ml de las muestra y se le dio el mismo tratamiento y procedimiento anterior obteniendo un resultado en la titilación de 23.1 ml

2:30 pm:Se tomaron otro 10 ml de las muestra y se le dio el mismo tratamiento y procedimiento anterior obteniendo un resultado en la titilación de 23.8 ml

2:40 pm: Se tomaron otro 10 ml de las muestra y se le dio el mismo tratamiento y procedimiento anterior obteniendo un resultado en la titilación de 43 ml


CALCULOS:
Se restan el valor de la muestra de 0 tiempo a los valores de los 10, 20, 30 y40 minutos.

Muestra de 10 min. : 23.0 – 18 = 5.0 ml
Muestra de 20 min. : 23.1 – 18= 5.1 ml
Muestra de 30 min. : 23.8 – 18= 5.8 ml
Muestra de 40 min. : 43.0 – 18= 23.8 ml











GRAFICA DE LOS CALCULOS


50

40

30
Volumen (ml)
20

10

10 20 30 40


TIEMPO




GRAFICA D LOS CALCULOS DE NITROGENO AMINICO LIBERADO EN LA REACCION


15

12
MG de nitrógeno
Aminico 9
Liberado
6

3

10 20 30 40


TIEMPO (min.)




CONCLUSIONES

En esta practica se utilizo el método de titilación, adaptado a un experimento sencillo donde se utilizo como substrato gelatina al 5% y al tener contacto con la tripsina, esta rompe las uniones peptidicas de la gelatina dejando grupos carboxilos libres antes de la acción de la enzima mientras mas tiempo se dejo actuar la enzima, mas grupos carboxilo libres titulables hubo en la solución.
El formol neutralizado utilizado en la practica se usa para que los grupos carboxilo se unan con los grupos aminolibres no cargados y así la titulación de los grupos carboxilo es mas exacta.
El calor a fugo directo fue utilizado solo para inhibir a la enzima pero esta inhibición por calor o desnaturalización es irreversible, por lo tanto se dejo actuar la enzima para poder llevar acabo la titilación.

CUESTIONARIO

1 sque es la gelatina utilizada como substrato n este experimento?
Es una proteína mucho mas fácilmente digestible, pero también es una proteína deficiente como fuente proteica.

sLa gelatina es buen alimento? sPor qué si o por que no?
No es buen alimento ya que es una proteína deficiente y si se utiliza como única fuente proteica resultaría desastroso.

sque puede decir acerca de los inhibidores de la tripsina?
El calor, el uso de ciertas sustancias como la p-aminobenzimidina, la acetamida, la fenilacetamida, la etilamina, la butilamida, el uso de compuestos órgano fosforados como el dietil o de paranitrofenilfosfato (DPT) inhiben a la tripina en su acción enzimático, especifica y totalmente.

sCuál es la acción especifica de la tripsina?
Hidroliza peptidos, amidas, esteres, etc.; en las uniones que involucran al grupo carboxilo de la arginina y la lisina.

Enumere por lo menos 5 enzimas proteo líticas, señalando su acción especifica
QUIMITRIPSINA: Desdobla los substratos sintéticos por el sitio del grupo tirsilo-carboxilo.
TRIPSINA: Hidroliza peptidos amidas, etc., en las uniones que involucran al grupo carboxilo dela arginina y la lisina
PPSINA: Actúa sobre substratos que contenga tirona y fenilnina así como proteinas.
ENDOPEPTIDASA: Actúan sobre grandes moléculas de proteinas
CARBOXIPEPTIDASAS: Desdoblan los dipéptido asilados cuando los grupos amino han sido bloqueados.

sla grafica obtenida comprueba los resultados?
Si comprueba los resultados que se debieron de obtener, ya que entre mas tiempo mas grupos titulables hubo en la practica.


sA que se le llama zimogeno y por que las enzimas proteo líticas en particular tienen que sintetizarse en forma de zimogenos?
Las enzimas proteo líticas activas del jugo gástrico es la pepsina que sin embargo, resulta completamente inactiva si no se encuentra en solución ácida, hace muchos años Sangley señalo que el fermento existe en la mucosa gástrica, bajo una forma inactiva mas resistente a los álcalis que la pepsina, forma a la cual se le dio el nombre de pepsinogeno, aceptándose el de zimogeno para cualquier forma inactiva de un fermento.

sEn que forma se activan los zimogenos para dar la enzima activa?
El cimógeno se activa por una hidrólisis pequeña de la proteína por lo tanto el zimogeno se transforma por la acción de determinadas sust. En la enzima activa.





BIBLIOGRAFIA

Curso de Química Biológica. V. deudoleu y A.D. Mareni, octava edición “El ateneo” Editorial

Tratado de Bioquímica. Benjamín Harrow y Abraham Mazur, 6ta edición, editorial Interamericana S.A.