Test de complementación genética o Prueba de Complementación Genética

Es una prueba que se usa para determinar si tendra lugar o no la complementación (compensación en forma de dominancia) en una célula con un Fenotipo mutante dado cuando otro Genoma mutante, que codifica el mismo Fenotipo mutante, se introduce en dicha célula.
Test de Complementación o Test de Complementación CIS-TRANS se realiza para confirmar el sitio de la mutación.En la prueba de complementación, con una mutación conocida como referencia, una mutación desconocida se identifica.
En esta prueba, se colocan dos mutaciones en el protoplasma común o es configuración cis o trans. La prueba cis trans proporciona una definición operativa del gen como la unidad de la función de la unidad que controla la síntesis de un polipéptido.

CIS -test
En este método, las dos mutaciones estan siendo examinadas en un protoplasma común en configuración cis o de enganche, es decir, ambas mutaciones estaran en los mismos cromosomas. La prueba CIS se utiliza para averiguar si una mutación se da en el sitio de la mutación / gen o esta en otro sitio. La prueba de la CEI es una prueba importante de control, que establece la validez de la prueba de correlación trans o complementación.
TRANS -testEn este método, las dos mutaciones que se estan examinando se colocan en el protoplasma común, en configuración trans o de repulsión, ambas mutaciones estaran en cromosomas diferentes.
El concepto de funciones de prueba cis-trans es simple. Si se produce una mutación desconocida en una mutación genética conocida, entonces la prueba da un resultado negativo que no habra producción de producto o tendremos un producto inactivado.
Si la mutación desconocida no se produce en el sitio de mutación genética conocida, entonces la prueba da un resultado positivo, es decir, habra producción de los productos, porque sabemos que hay dos copias del gen.
Si un gen esta mutado, el otro suplementara o codificara la proteína. Dado que ambas mutaciones en los genes son diferentes, el otro gen tendra la función de codificación de la proteína.
En el caso de una mutación que da un resultado negativo, no habra producción de la proteína ya que ambos genes tienen la mutación.
En muchos casos, sólo serealiza la prueba trans para confirmar el sitio de la mutación, ya que la construcción de un heterocigoto cis lleva mucho tiempo y es costoso.
Para la prueba trans, un animal o células mutantes conocido se cruza con animales o células mutantes desconocidos para obteneruna célula diploide que contiene las dos mutaciones en la configuración trans o de repulsión y se llama heterocigoto trans
Los resultados de la prueba trans son totalmente indiscutible, cuando las mutaciones conducen a la proteína total o parcialmente defectuosa o del producto totalmente abolido.
Este tipo de situación se presenta sólo cuando las mutaciones son causadas por deleciones, mutaciones de cambio de marco o mutaciones de terminación de la cadena.
El analisis se complica cuando las mutaciones son causadas por la sustitución que involucra nucleótidos diferentes, pero no hay alteración en la carga de aminoacidos, o el volumen de los aminoacidos.
La información proporcionada por el test cis trans o test de complementación es totalmente distinta de la obtenida de los analisis de la recombinación.
Complementación y recombinación no debe confundirse, son diferentes y dan información diferente. Recombinación da la relación entre dos genes, mientras que la complementación da información sobre la posición de la mutación.
A pesar de que la prueba cis-trans es una técnica ampliamente utilizada y muy útil, tiene algunas desventajas
1. No se puede utilizar cuando las mutaciones ocurren en genes dominantes o codominantes.
2. No se puedeutilizar para analisis de mutaciones polares.
3. No se puede utilizar para la comprensión de los genes que no codifican para las proteínas difusible o queson utilizadas en el mecanismo de regulación.
4. No se puede utilizar para los genes que codifican para un polipéptido que se integra en un complejo de proteínas o que forma dímeros.

Codones ambar, ocre y ópalo

Existen tres codones de terminación, que reciben distintos nombres. «UAG», el primero descubierto, se conoce como «codón ambar»; «UGA», como «codón ópalo»; y «UAA», como «codón ocre».
Codón ambar: Primera serie de mutaciones sin sentido que se descubrió.
Aislado por Harris Bernstein en los experimentos diseñados para resolver un debate entre Richard Epstein y Charles Steinberg.
El codón ambar (UAG) fue originado por una mutación por transvercion de un A/T a T/A, cambiando de este modo el codón de tipo salvaje (UUG), que codifica para leucina, por el codón ambar (UAG) que marca la terminación de la cadena, insertando una tirosina.
Codón ocre: La mutación ocre fue la segunda mutación del codón de parada por descubrir.
Dado un nombre de color para coincidir con el nombre de mutantes de color ambar, virus mutantes ocres tenían una propiedad similar en recuperar la capacidadinfecciosa con ciertos supresores de determinadas cepas de bacterias.
El conjunto de supresores mutantes de ocre era distinto de los supresores ambar, un triplete de nucleótidos diferentes.
A través de una serie de experimentos de mutación comparando los mutantes entre sí y con otros conocidos codones de aminoacidos, Sydney Brenner llegó a la conclusión de que las mutaciones de color ambar y ocre, correspondía a los tripletes de nucleótidos 'UAG' y “UAA'.
Codón ópalo: El tercer y último codón de parada en el código genético estandar fue descubierto poco después, lo que corresponde a un triplete de nucleótidos 'UGA'.
Las mutaciones sin sentido que ha creado este codón de parada prematuro.
El efecto de estas mutaciones sin sentido es producir la detención de la lectura del ARNm por parte de los ribosomas. Por lo tanto se produce una proteína truncada, que suele ser inactiva.

Utilidades de los mutantes en Biología Molecular

1- Para el analisis de la regulación de la división celular.
2- Para el estudio y determinación de las rutas metabólicas (sustratos, intermediarios, enzimas) de los organismos.
3- En investigaciones biomédicas (modelos eucariontes).
4- Para secuenciación de genes.
5- Para etiquetado y localización de proteínas.