INTRODUCCIÓN
Los cloroplastos deben su color verde a un pigmento denominado clorofila. Sin embargo, lo que en realidad existe en los cloroplastos es una mezcla de pigmentos representados principalmente por dos tipos de clorofila (clorofila a y clorofila b), por β caroteno y por xantofila.
Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad, lo cual permite su separación cuando una solución de la misma asciende por capilaridad por una tira de papel poroso (papel de filtro), ya que las mas solubles se desplazaran a mayor velocidad, pues acompañaran facilmente al disolvente a medida que éste va ascendiendo. De esta forma, al cabo de cierto tiempo, a lo largo del papel de filtro se iran situando los distintos pigmentos en forma de bandas coloreadas, tanto mas desplazadas cuanto mas solubles sean los pigmentos a que pertenecen y tanto mas anchas cuanto mayor sea la abundancia de estos en la mezcla.

OBJETIVOS
Extraer los pigmentos de hojas de espinacas y separarlos.
Revisar conceptos relacionados con la polaridad separación por cromatografía.
Aprender a realizar montajes sencillos para separar por cromatografía en papel, los componentes coloreados de una mezcla.
Conocer los criterios de selección de fases móviles considerando las diferencias de polaridad de compuestos de una mezcla.
Comprender los principios generales de la separación en cromatografía

DESARROLLO EXPERIMENTAL
Cromatografía en papel.Identificación de los pigmentos de la espinaca
1. Recorta un rectangulo de papel filtro de 11 cm x 4 cm
2. Realiza un par de cortes de 1 cm en la parte superior
3. Introduce un agitador por los huecos y verifica que el papel no llegue a tocar el fondo del vaso
4. Con un lapiz haz una marca a 1 cm en la parte inferior del papel
6. Coloca una hoja de espinaca sobre el area del papel de cromatografía, donde hiciste tu marca y transfiere con una moneda el pigmento al papel. Rueda la moneda varias veces sobre la hoja hasta obtener un punto oscuro de pigmento
7. Añade al vaso una disolución compuesta por una mezcla de hexano-acetona (9:1) hasta llegar un poco por debajo del punto de aplicación de la muestra. Asegúrate que la solución no llegue a la línea de pigmento en el papel.
8. Deja eluir la cromatografía hasta 0.5 cm del agitador y detenla removiendo el papel del vaso.
9. Marca con un lapiz hasta donde llegó el disolvente y deja secar el papel.

Cromatografía en capa fina
1. Emplea un tubo de ensayo para cada muestra, coloca 10 mg de muestra en cada tubo de ensayo y disuélvelo en 1 mL de disolvente (el que indique el profesor el día de la practica). Se emplearan placas de gel de sílice con revelador fluorescente, soportada en aluminio de 1 x 4 cm
2. Coloca un punto de aplicación a 0.5 cm del borde inferior, con ayuda de un capilar aplica la muestra y deja secar el disolvente.
3. Realiza en sayos con los disolventes quedispones para encontrar la mezcla de eluyentes en la cual el Rf sea lo mas próximo a 0.5 (emplea una placa diferente para cada sistema
Rellena la siguiente tabla:


OBSERVACIONES



CUESTIONARIO
1. Explica la diferencia entre los dos tipos de cromatografía que empleaste en esta practica.
DIFERENCIAS
Cromatografía en papel
Cromatografía en capa fina
La fase estacionaria esta constituida simplemente por una tira de papel filtro.
Ponemos en forma líquida los compuestos que queremos separar y luego lo metemos en una camara de vidrio.
La cromatografía en papel no sera capaz de separar ciertos compuestos que pueden ser muy parecidos o cuando alguno de estos se encuentre en una cantidad muy pequeña no lograra separarlo efectivamente.
En la de capa fina, el soporte es una placa de vidrio o aluminio con una 'fina capa' de producto sólido adherido a la misma.
Es una técnica que requiere de materiales mas específicos y sera capaz de detectar una pequeña diferencia entre los componentes de la muestra

2. Dibuja la cromatografía de los pigmentos de la espinaca e identifica cada una de las manchas.


3. Completa la siguiente tabla:

4. Compara los valores de Rf para cada pigmento y explica los datos.





5. Compara tus datos con los de tus compañeros ¿Fue el valor de Rf constante para cada pigmento?



6. Si hicieras una cromatografía en columna de los pigmentos de la espinaca ¿en qué ordenobtendrías los productos?



7. En la CPF ¿qué criterio usaste para elegir el primer sistema de eluyentes?

8. A partir de la información de tu tabla, ordena tus sistemas de eluyentes de menos polar a mas polar para cada uno de los casos.
Tiourea: Hexano, AcOEt y acetona
Acido salicílico: Hexano yAcOEt

9. De todos los reveladores que empleaste ¿cual fue el que encontraste mas útil en cada caso?
En el de la tiourea fue el H2SO4 y en el acido salicílico la camara de I
10. Si tuvieras una mezcla de la sustancia 1 y 2 ¿podrías separarla por cromatografía en columna? ¿Qué sistema emplearías?


CONCLUSIÓN
Al finalizar de la practica se observó que las dos cromatografías se parecían, pero como se explica en esta practica existen algunas diferencias, ya que utilizamos muy poca muestra en la capa fina que en el papel, ademas de ser mas selectiva con los eluyentes y reveladores. En la cromatografía en papel se pudo observar mejor hasta donde llego la mezcla.
Nota: no se realizó la cromatografía en capa fina con todos los eluyentes debido al tiempo.

BIBLIOGRAFÍA
Rodríguez de Armas, F. y Merino Rubio, J.J.: Dep. Ciencias Experimentales C.E.I. La Laguna (1985).
De la Hoz Huerta, J,; Recio Flores, E.; Alcantara Bello, J.J. y Siiva Henschkel, C. Dep. Ciencias Experimentales. I.B. Blas Cabrera Felipe Lanzarote (1986).
Prats, F. y del Amo Y. 'Trabajos practicos de Física, Química' (dos tomos) 2º de B.U.P. Akal (1983).