EXTRACCION DE ADN
* Objetivo
Enseñar una técnica de ADN convencional con el objetivo de
observar todo el proceso y obtener una concentración de ADN visible y
Observar su estructura fibrilar.
* Introducción:
El ADN es la sustancia que contiene el material genético de los seres
vivos ademas como el ADN se encuentra en todas las células de los
organismos vivos incluyendo por supuesto los animales, intentaremos extraer
esta importante molécula a partir de una muestra de hígado de
pollo para poder extraerlo se requiere una serie de pasos primero se tiene que
romper la membrana plasmatica, también debe romperse también
la membrana nuclear para dejar libre el ADN, Por último hay que proteger
el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que
precipite en alcohol. El proceso de extracción de ADN
desde una célula es el primer paso para muchos procedimientos de los
laboratorios de biotecnología. Los científicos deben ser
capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se
encuentran en las células, evitando que el ADN se rompa. El material que se utilizo para esta actividad es muy facil
de encontrar en casa y el procedimiento es muy sencillo .Cada uno de los
ingredientes tiene su propia función.
* Material:
* Una muestra animal (hígado de pollo)
* Una licuadora
* 2 vasos de precipitado
* 5 tubos de ensayo
* 1 colador
* Filtros para café
* Pistilo de madera
* Microscopio
*1 cuchillo
Reactivo
* Agua destilada
* Alcohol
* Detergente liquido
* Jugo de piña
* Ablandador de carne
* Procedimientos
Licuar el material vegetal o animal con 100 ml de agua destilada durante 15
segundos a velocidad alta, hasta obtener un caldo de células muy fino.
Esto es con la finalidad de destruir las células de la muestra a la que
se le extraera el ADN.
Vierte el concentrado de células a
través de un colador, dentro de un vaso de precipitado.
Mide cuanto de concentrado de células se
obtuvo y añade 1/6 de esa cantidad de detergente líquido y
mezclar. Deja reposar 10 minutos.
Vierte la mezcla en tubos de ensayo hasta 1/3 de
su capacidad.
Añade una pizca de enzima a cada tubo de
ensayo y agítalos suavemente. ¡Cuidado! Si lo
agitas muy fuerte romperas el ADN.
Ladea el tubo de ensayo y lentamente añade
el alcohol sobre la pared del
tubo de ensayo de manera que forme una capa sobre la mezcla. Sigue
vertiendo alcohol hasta tener la misma cantidad de alcohol y de mezcla. El producto obtenido se llevara desde la mezcla hasta la
capa de alcohol.
disuelve en cierto grado en el citoplasma de las células. Se considera como una
hormona vegetal debido a que es un producto natural del metabolismo y a que
interacciona con otras fitohormonas en cantidadestraza. Los efectos del etileno
pueden ser apreciados durante períodos críticos —maduración de los frutos,
abscisión de frutos y hojas, y la senescencia— del ciclo de vida de una planta.4.1. LOS AMBIENTES ESTRESANTES Y LAS CONCENTRACIONES ELEVADAS DE AUXINAS
PROMUEVEN LA PRODUCCIÓN DE ETILENO EN LOS TEJIDOS VEGETALES.El etileno es
normalmente la hormona más fácil de ensayar. Puesto que es un gas que se
libera por los tejidos, no requiere extracción ni purificación antes de su
análisis por cromatografía gaseosa.La biosíntesis del etileno comienza con el
aminoácido metionina, el cual reacciona con ATP para formar un compuesto
conocido como S-adenosilmetionina, abreviadamente SAM.A continuación, el SAM se
excinde en dos moléculas diferentes, una de las cuales contiene un anillo
compuesto de tres átomos de carbono. Este compuesto, conocido como ácido
1-aminociclopropano-1-carboxílico (ACC), se convierte en etileno, CO2, y amonio
por una enzima presente en el tonoplasto, todavía no aislada, denominada enzima
formadora de etileno (EFE).Aparentemente, la reacción formadora de ACC es la
etapa de la ruta que es afectada por algunos tratamientos o estados
fisiológicos (por ejemplo, altas concentraciones de auxina, heridas, polución
atmosférica, maduración de los frutos, senescencia de las flores,
encharcamiento, etc.) que estimulan la producción de etileno por los tejidos
vegetales.4.2. EFECTOS FISIOLÓGICOS PRODUCIDOS POR EL
ETILENO.Estimula la maduración de los frutos. Produce la triple
respuesta en plántulas.Parece jugar un papelimportante
en la formación de raíces adventicias.Estimula la abscisión de hojas y frutos. Estimula la floración en Bromelias. Induce la feminidad en flores de plantas
monoicas.Estimula la apertura floral.Estimula la senescencia floral y
foliar.Induce epinastia en hojas.4.2.1. Estimula la maduración de los frutos.La
maduración de los frutos engloba un número de cambios
(ver tabla 14.1). En los frutos carnosos baja el contenido en clorofila,
pudiéndose formar otros pigmentos, causantes del cambio de color del fruto. Al mismo tiempo, se ablanda la
parte carnosa del
fruto. Ello es el resultado de la digestión enzimática de la
pectina, componente principal de la lámina media. Cuando
la lámina media se debilita, las células pueden deslizarse unas sobre otras.
También durante este período, los almidones y los
ácidos orgánicos o, como en el caso del aguacate (Persea americana), los azúcares son metabolizados a
azúcares. A consecuencia de estos cambios, los frutos se vuelven grandes y
sabrosos y, por tanto, atractivos para los animales que los comen y que,
indirectamente, diseminan las semillas.Durante la época de maduración de muchos
frutos —incluyendo tomates, aguacates y peras— hay un gran incremento en la respiración
celular, manifestado por un mayor consumo de oxígeno. Esta fase se conoce como
climaterio, y los frutos que la desarrollan, frutos climatéricos. (Los frutos
que muestran una maduración gradual, tales como los cítricos,
uvas, y fresas, se denominan frutos no climatéricos) Ver tablas 14.2.Cuando
frutos climatéricosinmaduros se tratan con etileno, se acelera el comienzo del
climaterio. Cuando frutos no climatéricos se tratan de la misma forma, la
magnitud de la tasa respiratoria se incrementa en función de la concentración
de etileno, pero el tratamiento no dispara la producción endógena de etileno y
por lo tanto no se acelera la maduración. No se conocen las relaciones entre el
climaterio y los demás aspectos de la maduración, pero cuando se reduce la intensidad
de la fase climatérica queda detenida la madura
Con un pistilo de madera arrastrar el producto obtenido que
esta encima en el alcohol hacia el microscopio y observar.
* Resultados
El detergente líquido y la acción de la licuadora rompen la
membrana plasmatica y nuclear, el jugo de piña contiene una
enzima que protege al ADN de las proteínas que lo puedan contaminar y el
alcohol estabiliza lamolécula.
Siguiendo esta secuencia de pasos se obtiene como resultado hebras de ADN, observables a
simple vista y que pueden ser vistas mas detalladamente atreves del microscopio.
* Preguntas
¿Para que se usa
el detergente? Para deshacer las membranas y
para dejar salir el ADN.
¿Qué es una enzima proteolica? Son
enzimas que descomponen en unidades mas
pequeñas las proteínas, estan presenten es bacterias y
plantas pero mas abundantes en animales, a estas enzimas también se les
llama proteinasas.
¿Qué es ese material pegajoso? Es el ADN
separado del
hígado de pollo que se muestra visiblemente en el alcohol.
¿Para que se usa el alcohol? Para que
estabilice la molécula de ADN evitando que se rompa.
Observaciones de la practica
Conclusión:
El ADN es muy importante, esta presente en todos los organismos vivos ya que el
ADN es una macro molécula que forma parte de todas las células,
contiene la información genética usada en el desarrollo y el
funcionamiento de los organismos vivos y de algunos virus.
Esta practica me gusto mucho ya que pude aprender e identificar las
características y propiedades del ADN, así
mismo pude realizarla extracción de este en una muestra animal en este
caso seria el hígado de pollo, y se pudo identificar y observa la
estructura del ADN a través del
microscopio.